Набор Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Наборы для прамога лізісу клетак, гатовыя да аднаэтапнай qRT-PCR
Апісанні
У гэтым наборы выкарыстоўваецца унікальная буферная сістэма для лізісу, якая можа хутка вызваляць РНК з культывуемых узораў клетак для рэакцый RT-qPCR, тым самым ухіляючы працаёмкі і працаёмкі працэс ачысткі РНК.Шаблон РНК можна атрымаць усяго за 7 хвілін.5×Direct RT Mix і 2×Рэагенты Direct qPCR Mix-SYBR, якія ўваходзяць у камплект, дазваляюць хутка і эфектыўна атрымаць колькасныя вынікі ПЦР у рэальным часе.
5×Direct RT Mix і 2×Direct qPCR Mix-SYBR мае моцную талерантнасць да інгібітараў, і лізат узораў можна выкарыстоўваць у якасці шаблону непасрэдна для RT-qPCR.Гэты набор змяшчае унікальную высокаафінную зваротную транскрыптазу Foregene з РНК і ДНК-палімеразу Hot D-Taq, dNTP, MgCl2, рэакцыйны буфер, ПЦР-аптымізатар і стабілізатар.
Тэхнічныя характарыстыкі
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Складнікі камплекта
| Частка I | Буфер CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Буфер ST | |
| Частка II | Сціральнік ДНК |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× эталонны фарбавальнік ROX | |
| ddH2O без РНКазы | |
| Інструкцыя | |
Асаблівасці і перавагі
■Проста і эфектыўна: з дапамогай тэхналогіі Cell Direct RT ўзоры РНК можна атрымаць усяго за 7 хвілін.
■ Попыт на выбарку невялікі, можна праверыць усяго 10 клетак.
■ Высокая прапускная здольнасць: ён можа хутка выяўляць РНК у клетках, культывуемых у 384, 96, 24, 12, 6-лункавых пласцінах.
■ DNA Eraser можа хутка выдаліць вызваленыя геномы, значна паменшыць уплыў на наступныя эксперыментальныя вынікі.
■ Аптымізаваная сістэма RT і qPCR робіць двухэтапную зваротную транскрыпцыю RT-PCR больш эфектыўнай, а ПЦР больш спецыфічнай і больш устойлівай да інгібітараў рэакцыі RT-PCR.
Прыкладанне камплекта
Сфера прымянення: культываванне клетак.
- РНК, вызваленая ў выніку лізісу ўзору: прымяняецца толькі да шаблону RT-qPCR гэтага набору.
- Набор можа быць выкарыстаны для наступных мэт: аналіз экспрэсіі генаў, праверка апасродкаванага siRNA эфекту сайленсінгу генаў, скрынінг лекаў і г.д.
Дыяграма
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Частка I гэтага набору павінна захоўвацца пры тэмпературы 4 ℃;Частка II павінна захоўвацца пры -20 ℃.
Foregene Protease Plus II варта захоўваць пры 4℃, не замярзаць пры -20 ℃.
Рэагент 2×Direct qPCR Mix-SYBR трэба захоўваць пры -20℃у цемры;пры частым выкарыстанні яго таксама можна захоўваць у 4℃ для кароткачасовага захоўвання (выкарыстаць на працягу 10 дзён).
Прынцыпы распрацоўкі праймераў ПЦР у рэальным часе
Пярэдні буквар і адваротны буквар
Для ПЦР у рэжыме рэальнага часу дызайн праймера вельмі важны.Праймеры звязаны са спецыфічнасцю і эфектыўнасцю ПЦР-ампліфікацыі і могуць быць распрацаваны з улікам наступных прынцыпаў:
Даўжыня буквара: 18-30 п.н.
Змест ГХ: 40-60%.
Значэнне Tm: праграмнае забеспячэнне для распрацоўкі Primer 5, можа даць значэнне Tm праймера.Значэнні Tm праймераў вышэй і ніжэй па плыні павінны быць як мага больш блізкімі.Таксама можна выкарыстоўваць формулу разліку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Пры правядзенні ПЦР у якасці тэмпературы адпалу звычайна выбіраецца тэмпература ніжэйшая за значэнне Tm праймера на 5 °C (адпаведнае павелічэнне тэмпературы адпалу можа павялічыць спецыфічнасць рэакцыі ПЦР).
Праймеры і прадукты ПЦР:
Даўжыня прадукту ПЦР-ампліфікацыі праймера пераважна складае 100-150 пн.
Наколькі гэта магчыма, варта пазбягаць дызайнерскіх грунтовак у другаснай структурнай вобласці шаблону.
Пазбягайце ўтварэння 2 ці больш камплементарных асноў паміж 3'-канцамі праймераў уверх і ўніз па плыні.
Канцавая база праймера 3′ не можа прысутнічаць з 3 дадатковымі паслядоўнымі G або C.
Самі праймеры не могуць мець дадатковыя структуры, інакш утворыцца шпількавая структура, якая ўплывае на ПЦР-ампліфікацыю.
ATCG павінен быць размеркаваны як мага больш раўнамерна ў паслядоўнасці праймера, і варта пазбягаць 3'-тэрмінальнага падставы, паколькі T.
Дадатак 1: дадатковы пакет кампанентаў Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Раствор для лізісу клетак
|
| |||
| Складнікі камплекта (24-лункавая сістэма лізіс / лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| часткая | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| часткаII | Сціральнік ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
|
| ||
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 50× эталонны фарбавальнік ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкцыі па эксплуатацыі:
