Набор для вылучэння агульнай РНК жывёл Наборы для экстракцыі і ачысткі агульнай РНК для тканін і клетак жывёл
Апісанне камплекта:
Хутка і эфектыўна здабываць агульную РНК высокай чысціні і высокай якасці з розных тканак жывёл.
Няма неабходнасці турбавацца аб дэградацыі РНК.Уся сістэма не ўтрымлівае РНКазы
Эфектыўна выдаліце ДНК з дапамогай ДНК-ачышчальнай калонкі
Выдаліць ДНК без дадання ДНКазы
Проста - усе аперацыі выконваюцца пры пакаёвай тэмпературы
Хуткі - аперацыя можа быць завершана за 30 хвілін
Бяспечны - не выкарыстоўваецца арганічны рэагент
Высокая чысціня—OD260/280≈1.8-2.1
Апісанні набораў
50 Preps, 200 Preps
Гэты набор выкарыстоўваекалонка спіна і формулараспрацаваны нашай кампаніяй, які можа здабываць агульную РНК высокай чысціні і высокай якасці з розных тканак жывёл з высокай эфектыўнасцю. Ён забяспечвае эфектыўную калонку для ачысткі ДНК, якая можа лёгка аддзяляць і адсарбаваць геномную ДНК з супернатанту і тканкавага лізата, проста і эканоміць час;Калонка толькі з РНК можа эфектыўна звязваць РНК і можа быць апрацавана адначасова з дапамогай унікальнай формулы Шмат узораў.
Уся сістэма не ўтрымлівае РНКазы, так што вынятая РНК не дэградуе;Буфер RW1, Буфер RW2 сістэма прамывання буфера, так што атрыманая РНК не ўтрымлівае бялку, ДНК, іёнаў і забруджванняў арганічнымі злучэннямі.
Складнікі камплекта
| Набор для вылучэння агульнай РНК жывёл | ||
| Складнікі камплекта | РЭ-03011 | РЭ-03014 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер RL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RL2 | 15 мл | 60 мл |
| Буфер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без РНКазы | 10 мл | 40 мл |
| Слупок толькі РНК | 50 | 200 |
| Калонка ачысткі ДНК | 50 | 200 |
| Кіраўніцтва па эксплуатацыі | 1 шт | 1 шт |
Інфармацыя аб прадукце
| фармат | Круціцца слупок | Ачышчальны кампанент | Калонка Foregene, рэагент |
| Флюс | 1-24 пробы | Час на падрыхтоўку | ~30 хвілін (24 узоры) |
| Цэнтрыфуга | Настольная цэнтрыфуга | Пиролизное аддзяленне | Цэнтрабежная сепарацыя |
| Узор | Ткані жывёл;вочка | Колькасць узораў | Тканіна: 10-20 мг;Ячэйка:(1-5)×106 |
| Аб'ём элюцыі | 50-200 мкл | Максімальны аб'ём загрузкі | 850 мкл |
Асаблівасці і перавагі
■ Няма неабходнасці турбавацца аб дэградацыі РНК;уся сістэма не змяшчае РНКазы
■ Эфектыўна выдаляйце ДНК з дапамогай ДНК-ачышчальнай калонкі
■ Выдаленне ДНК без дадання ДНКазы
■ Просты - усе аперацыі выконваюцца пры пакаёвай тэмпературы
■ Хуткі - аперацыю можна выканаць за 30 хвілін
■ Бяспечны - арганічны рэагент не патрабуецца
■ Высокая чысціня -OD260/280≈1.8-2.1
Прыкладанне камплекта
Ён падыходзіць для экстракцыі і ачысткі агульнай РНК з розных свежых або замарожаных тканак жывёл або культывуемых клетак.
Параметры прадукту
■ Дадатковыя прыкладанні: сінтэз кДНК першага ланцуга, RT-PCR, малекулярнае кланаванне, Northern Blot і г.д.
■ Узоры: тканіны жывёл, культывуюцца клеткі
■ Дазавання: тканіны 10-20 мг, клеткі (2-5) × 106
■ Максімальная здольнасць звязваць ДНК ачышчальнай калонкі: 80 мкг
■ Аб'ём элюцыі: 50-200 мкл
Дыяграма
Набор для вылучэння агульнай РНК жывёл, апрацаваны 20 мг
Свежыя ўзоры мышэй, вазьміце 5% вычышчанай агульнай РНК 1% агар
Электрафарэз з гликогелем
1: Селязёнка 2: Нырка
3: Печань 4: Сэрца
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Набор можа захоўвацца 24 месяцы пры пакаёвай тэмпературы (15–25 ℃) або 2–8 ℃ больш працяглы час.Буфер RL1 можна захоўваць пры 4 ℃ на працягу 1 месяца пасля дадання β-меркаптаэтанолу (неабавязкова).
Цытаваныя артыкулы
1.IF:18.808:Чжэн К., Цынь Ф., Ло Р. і інш.Ліпідападобныя наначасціцы, загружаныя мРНК, для рэдагавання асновы печані праз аптымізацыю цэнтральнага кампазітнага дызайну.прысл.Функц.Матэр.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.КАЛІ:18.187:He X, Hong W, Yang J і інш.Спантанны апоптоз клетак у тэрапеўтычным прэпараце ствалавых клетак аказвае імунамадулюючыя дзеянне праз вызваленне фасфатыдылсерыну.Перадача сігналу Target Ther.14 ліпеня 2021 г.; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.КАЛІ: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J і інш.Мадыфікацыя тРНК N7-Метилгуанозин ўзмацняе трансляцыю онкогенных мРНК і спрыяе прагрэсаванню внутріпеченочного холангиокарциномы.Mol Cell.29 ліпеня 2021 г.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.КАЛІ: 9,225: Цао Х, Шу І, Чэнь І і інш.Mettl14-апасродкаваная мадыфікацыя m6A палягчае рэгенерацыю печані шляхам падтрымання гамеастазу эндаплазматычнай сеткі.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Наборы для ізаляцыі рнк іншыя ўзорныя крыніцыдаступныя:
Клетка, расліна, вірус, кроў і г.д.
РНК не экстрагируется або выхад РНК нізкі
Часта існуюць розныя фактары, якія ўплываюць на эфектыўнасць аднаўлення, такія як: змест РНК у ўзоры тканіны, метад аперацыі, аб'ём элюцыі і г.д.
1. Падчас працы праводзілі ледзяную ванну або крыягеннае (4 °C) цэнтрыфугаванне.
Рэкамендацыя: Працуйце пры пакаёвай тэмпературы (15-25 °C) на працягу ўсяго працэсу, не выкарыстоўвайце ванну з лёдам і не цэнтрыфугуйце пры нізкіх тэмпературах.
2. Няправільнае захаванне ўзору або празмерны час захоўвання ўзору.
Рэкамендацыя: Захоўвайце ўзоры пры тэмпературы -80 °C або замарожвайце ў вадкім азоце і пазбягайце паўторнага замарожвання-адтавання;паспрабуйце выкарыстоўваць свежую тканіну або культывуюцца клеткі для экстракцыі РНК.
3. Недастатковы лізіс пробы.
Рэкамендацыя: пры гамагенізацыі тканіны пераканайцеся, што тканіна дастаткова гамагенізавана і што клеткі тканіны дастаткова расшчаплены, каб растлумачыць вызваленне РНК.
4. Элюент дададзены няправільна.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што ddH без РНКазы2O дадаюць па кроплях у сярэдзіну мембраны ачышчальнай калонкі.
5. Правільны аб'ём абсалютнага этанолу не быў дададзены ў буфер RL2 або буфер RW2.
Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі, дадайце патрэбны аб'ём абсалютнага этанолу ў буфер RL2 і буфер RW2 і добра змяшайце перад выкарыстаннем набору.
6. Дазоўка ўзору тканіны не падыходзіць.
Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце 10-20 мг тканіны або (1-5) × 106клетак на 500 мкл буфера RL1, так як празмернае выкарыстанне тканін можа прывесці да зніжэння экстракцыі РНК.
7. Няправільны аб'ём элюцыі або няпоўная элюцыя.
Рэкамендацыя: аб'ём элюента ачышчальнай калонкі складае 50-200 мкл;калі эфект элюіравання не з'яўляецца здавальняючым, рэкамендуецца падоўжыць час размяшчэння пры пакаёвай тэмпературы пасля дадання папярэдне нагрэтага ddH без РНКазы2О, напрыклад, на працягу 5-10 хвілін.
8. У ачышчальнай калоне ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2.
Рэкамендацыя: калі ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2, цэнтрыфугаванне пустой прабіркі на працягу 1 хвіліны, час для аперацыі цэнтрыфугавання пустой прабіркі можна павялічыць да 2 хвілін, або ачышчальную калонку можна паставіць пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін, каб адэкватна выдаліць рэшткі этанолу.
Вычышчаная РНК дэградуе
Якасць ачышчанай РНК залежыць ад такіх фактараў, як захаванне ўзору, заражэнне РНКазой, маніпуляцыі і г.д.
1. Узоры тканін не захоўваюцца своечасова.
Рэкамендацыя: калі ўзоры тканіны або клеткі не былі выкарыстаны своечасова пасля збору, іх варта неадкладна правесці ў крыякансервацыі пры -80 °C або ў вадкім азоце.Каб атрымаць РНК, выкарыстоўвайце толькі што ўзяты ўзор тканіны або клеткі, калі гэта магчыма.
2. Паўторнае замарожванне-адтаванне узораў тканін.
Рэкамендацыя: пры захоўванні ўзораў тканіны лепш разрэзаць іх на невялікія кавалачкі для захавання і выдаліць адзін з кавалкаў пры іх выкарыстанні, каб пазбегнуць паўторнага замарожвання-размарожвання ўзору і дэградацыі РНК.
3. РНКазу ўводзяць або не надзяваюць падчас аперацыі аднаразовыя пальчаткі, маскі і інш.
Рэкамендацыя: Эксперыменты па экстракцыі РНК лепш за ўсё праводзіць у асобных памяшканнях для маніпуляцый з РНК, а стол перад эксперыментам прыбіраць.
Апранайце аднаразовыя пальчаткі і маскі падчас эксперыменту, каб звесці да мінімуму дэградацыю РНК, выкліканую ўвядзеннем РНКазы.
4. Рэагенты забруджваюцца РНКазой падчас выкарыстання.
Рэкамендацыя: заменіце на новы набор для вылучэння агульнай РНК жывёл для адпаведных эксперыментаў.
5. Цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры апрацоўцы РНК, забруджаныя РНКазой.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі, піпеткі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры экстракцыі РНК, не ўтрымліваюць РНКазы.
Вычышчаная атрыманая РНК уплывае на далейшыя эксперыменты
РНК, ачышчаная ачышчальнай калонкай, калі іёны солі, утрыманне бялку занадта вялікае, паўплывае на наступны эксперымент, напрыклад: зваротная транскрыпцыя, Northern Blot і інш.
1. Элюіраваная РНК мае рэшткі іёнаў солі.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што правільны аб'ём этанолу быў дададзены ў буфер RW2, і выканайце 2 прамывання ачышчальнай калонкі пры цэнтрабежнай хуткасці, указанай для працы;калі ёсць рэшткі іёнаў солі, пакіньце ачышчальную калонку ў буферы RW2 на 5 хвілін пры пакаёвай тэмпературы і правядзіце цэнтрыфугаванне для максімальнага выдалення забруджвання солямі.
2. Рэшткі этанолу ў элюированной РНК.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што пасля прамывання буферам RW2 выканайце аперацыю цэнтрыфугавання пустой прабіркі на хуткасці цэнтрыфугавання, указанай для працы, павялічце час цэнтрыфугавання пустой прабіркі да 2 хвілін, калі ўсё яшчэ ёсць рэшткі этанолу, або пакіньце яе пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін пасля цэнтрыфугавання пустой прабіркі, каб максымізаваць выдаленне рэшткаў этанолу.
