Набор для выдзялення агульнай РНК клетак Наборы для ачысткі выдзялення агульнай РНК з клетак
Апісанне камплекта:
Высокаачышчаную і якасную сумарную РНК можна атрымаць з розных культывуюцца клетак за 11 хвілін.
Без РНКазы
Працуе пры пакаёвай тэмпературы (15-25 ℃)
З калонкай для ачысткі ДНК
Высокі выхад РНК
Хутка: скончыце экстракцыю за 11 хвілін
Бяспека: няма арганічных хімікатаў
Апісанне
У гэтым наборы выкарыстоўваюцца спінавая калонка і формула, распрацаваныя Foregene, якія могуць эфектыўна здабываць агульную РНК высокай чысціні і якасці з клетак, культываваных у 96, 24, 12 і 6-лункавых пласцінах.
Набор забяспечвае эфектыўную калонку для ачысткі ДНК, якая можа лёгка аддзяляць супернатант і клеткавы лізат, звязваць і выдаляць геномную ДНК.Аперацыя простая і зэканоміць час.
TКалонка толькі для РНК можа эфектыўна звязваць РНК з дапамогай унікальнай формулы.Вялікая колькасць узораў можа быць апрацавана адначасова.
Складнікі камплекта
| Склад камплекта | РЭ-03111 | РЭ-03114 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер cRL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер cRL2 | 15 мл | 60 мл |
| Буфер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без РНКазы | 10 мл | 40 мл |
| Слупок толькі РНК | 50 | 200 |
| Калонка ачысткі ДНК | 50 | 200 |
| Інструкцыя | 1 | 1 |
*Калі ласка, апранайце пальчаткі і прымайце меры абароны падчас працы, паколькі буфер cRL1 і буфер RW1 утрымліваюць раздражняльныя хаатропныя солі.
Асаблівасці і перавагі
■ Увесь працэс праводзіцца пры пакаёвай тэмпературы (15-25 ℃), без ледзяной ванны і нізкатэмпературнага цэнтрыфугавання.
■ Увесь набор не ўтрымлівае РНКазы, не трэба турбавацца аб дэградацыі РНК.
■ Калонка для ачысткі ДНК спецыяльна звязвае ДНК, так што набор можа выдаліць забруджванне геномнай ДНК без дадання дадатковай ДНКазы.
■ Высокі выхад РНК: Калонка толькі РНК і ўнікальная формула могуць эфектыўна ачысціць РНК.
■ Высокая хуткасць: просты ў кіраванні і можа быць выкананы за 11 хвілін.
■ Бяспека: арганічны рэагент не патрабуецца.
■ Высокая якасць: вычышчаная РНК мае высокую чысціню, не ўтрымлівае бялку і іншых прымешак і можа адпавядаць розным наступным эксперыментам.
Прыкладанне камплекта
Ён падыходзіць для экстракцыі і ачысткі агульнай РНК з культывуемых клетак у 96, 24, 12 і 6-лункавых пласцінах.
Працоўны працэс
Дыяграма
Дыяграма акумулятарнай батарэі з агарозным гелем для набору для выдзялення агульнай РНК клетак апрацавала вышэйзгаданую розную колькасць клетак, аб'ём элюіравання 20 мкл, 2 мкл вычышчанай агульнай РНК 1%.
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Набор можа захоўвацца 12 месяцаў пры пакаёвай тэмпературы (15–25 ℃) або 2–8 ℃ больш працяглы час (24 месяцы).
Буфер cRL1 можна захоўваць пры тэмпературы 4 ℃ на працягу 1 месяца пасля дадання 2-гідраксі-1-этантыёлу (неабавязкова).
РНК не экстрагируется або выхад РНК нізкі
Часта існуюць розныя фактары, якія ўплываюць на эфектыўнасць аднаўлення, такія як: змест РНК у ўзоры тканіны, метад аперацыі, аб'ём элюцыі і г.д.
1. Падчас працы праводзілі ледзяную ванну або крыягеннае (4 °C) цэнтрыфугаванне.
Рэкамендацыя: Працуйце пры пакаёвай тэмпературы (15-25 °C) на працягу ўсяго працэсу, не выкарыстоўвайце ванну з лёдам і не цэнтрыфугуйце пры нізкіх тэмпературах.
2. Няправільнае захаванне ўзору або празмерны час захоўвання ўзору.
Рэкамендацыя: Захоўвайце ўзоры пры тэмпературы -80 °C або замарожвайце ў вадкім азоце і пазбягайце паўторнага замарожвання-адтавання;паспрабуйце выкарыстоўваць свежую тканіну або культывуюцца клеткі для экстракцыі РНК.
3. Недастатковы лізіс пробы.
Рэкамендацыя: пры гамагенізацыі тканіны пераканайцеся, што тканіна дастаткова гамагенізавана і што клеткі тканіны дастаткова расшчаплены, каб растлумачыць вызваленне РНК.
4. Элюент дададзены няправільна.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што ddH без РНКазы2O дадаюць па кроплях у сярэдзіну мембраны ачышчальнай калонкі.
5. Правільны аб'ём абсалютнага этанолу не быў дададзены ў буфер RL2 або буфер RW2.
Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі, дадайце патрэбны аб'ём абсалютнага этанолу ў буфер RL2 і буфер RW2 і добра змяшайце перад выкарыстаннем набору.
6. Дазоўка ўзору тканіны не падыходзіць.
Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце 10-20 мг тканіны або (1-5) × 106клетак на 500 мкл буфера RL1, так як празмернае выкарыстанне тканін можа прывесці да зніжэння экстракцыі РНК.
7. Няправільны аб'ём элюцыі або няпоўная элюцыя.
Рэкамендацыя: аб'ём элюента ачышчальнай калонкі складае 50-200 мкл;калі эфект элюіравання не з'яўляецца здавальняючым, рэкамендуецца падоўжыць час размяшчэння пры пакаёвай тэмпературы пасля дадання папярэдне нагрэтага ddH без РНКазы2О, напрыклад, на працягу 5-10 хвілін.
8. У ачышчальнай калоне ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2.
Рэкамендацыя: калі ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2, цэнтрыфугаванне пустой прабіркі на працягу 1 хвіліны, час для аперацыі цэнтрыфугавання пустой прабіркі можна павялічыць да 2 хвілін, або ачышчальную калонку можна паставіць пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін, каб адэкватна выдаліць рэшткі этанолу.
Вычышчаная РНК дэградуе
Якасць ачышчанай РНК залежыць ад такіх фактараў, як захаванне ўзору, заражэнне РНКазой, маніпуляцыі і г.д.
1. Узоры тканін не захоўваюцца своечасова.
Рэкамендацыя: калі ўзоры тканіны або клеткі не былі выкарыстаны своечасова пасля збору, іх варта неадкладна правесці ў крыякансервацыі пры -80 °C або ў вадкім азоце.Каб атрымаць РНК, выкарыстоўвайце толькі што ўзяты ўзор тканіны або клеткі, калі гэта магчыма.
2. Паўторнае замарожванне-адтаванне узораў тканін.
Рэкамендацыя: пры захоўванні ўзораў тканіны лепш разрэзаць іх на невялікія кавалачкі для захавання і выдаліць адзін з кавалкаў пры іх выкарыстанні, каб пазбегнуць паўторнага замарожвання-размарожвання ўзору і дэградацыі РНК.
3. РНКазу ўводзяць або не надзяваюць падчас аперацыі аднаразовыя пальчаткі, маскі і інш.
Рэкамендацыя: Эксперыменты па экстракцыі РНК лепш за ўсё праводзіць у асобных памяшканнях для маніпуляцый з РНК, а стол перад эксперыментам прыбіраць.
Апранайце аднаразовыя пальчаткі і маскі падчас эксперыменту, каб звесці да мінімуму дэградацыю РНК, выкліканую ўвядзеннем РНКазы.
4. Рэагенты забруджваюцца РНКазой падчас выкарыстання.
Рэкамендацыя: заменіце на новы набор для вылучэння агульнай РНК жывёл для адпаведных эксперыментаў.
5. Цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры апрацоўцы РНК, забруджаныя РНКазой.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі, піпеткі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры экстракцыі РНК, не ўтрымліваюць РНКазы.
Вычышчаная атрыманая РНК уплывае на далейшыя эксперыменты
РНК, ачышчаная ачышчальнай калонкай, калі іёны солі, утрыманне бялку занадта вялікае, паўплывае на наступны эксперымент, напрыклад: зваротная транскрыпцыя, Northern Blot і інш.
1. Элюіраваная РНК мае рэшткі іёнаў солі.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што правільны аб'ём этанолу быў дададзены ў буфер RW2, і выканайце 2 прамывання ачышчальнай калонкі пры цэнтрабежнай хуткасці, указанай для працы;калі ёсць рэшткі іёнаў солі, пакіньце ачышчальную калонку ў буферы RW2 на 5 хвілін пры пакаёвай тэмпературы і правядзіце цэнтрыфугаванне для максімальнага выдалення забруджвання солямі.
2. Рэшткі этанолу ў элюированной РНК.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што пасля прамывання буферам RW2 выканайце аперацыю цэнтрыфугавання пустой прабіркі на хуткасці цэнтрыфугавання, указанай для працы, павялічце час цэнтрыфугавання пустой прабіркі да 2 хвілін, калі ўсё яшчэ ёсць рэшткі этанолу, або пакіньце прабірку пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін
