(96-лункавы) набор QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Апісанні
The(96-лунка) QuickEasyTM Набор Cell Direct RT-qPCR–SYBR Грын Ізабяспечваеунікальная буферная сістэма лізісto хутка вызваліць РНКз культывуецца клеткіузораў для рэакцый RT-qPCR, ухіляючы працаёмкае і працаёмкаеПрацэс ачысткі РНК, які займае ўсяго 7 хвілін, каб атрымаць неабходны шаблон РНК.The5× Direct RT Mixі2× Direct qPCR Mix-SYBRу камплекце можна хутка іэфектыўна атрымліваць колькасныя вынікі ў рэжыме рэальнага часуВынікі ПЦР.
5× Direct RT Mix і 2× Direct qPCR Mix-SYBR маюць моцную талерантнасць да інгібітараў і могуць выкарыстоўваць лізат узору для тэсціравання ў якасці шаблону для эфектыўнай зваротнай транскрыпцыі і спецыфічнай ампліфікацыі.Рэагент змяшчае унікальную зваротную транскрыптазу Foregene з высокім сродством да РНК, а таксама ДНК-палімеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2 , буфер рэакцыі, аптымізатар і стабілізатар ПЦР і можа выкарыстоўвацца ў спалучэнні з буферам лізісу для хуткага, лёгкага і дакладнага выяўлення ўзору, і ён мае характарыстыкі высокай адчувальнасці, высокай спецыфічнасці і добрай стабільнасці.
Набор прызначаны для мікрасістэмнага лізісу 96-лункавых культывуемых клетак і мае добрую аднастайнасць і кансістэнцыю;кампаненты набору забяспечваюць 96 рэакцый лізісу, 96 рэакцый зваротнай транскрыпцыі і 96×2 рэакцый кПЦР, якія могуць адпавядаць пласціне з 96-лункавымі клеткамі для аднаразовага выкарыстання, пазбягаючы забруджвання, выкліканага шматразовым адкрыццём, замарожваннем і адтаваннем рэагентаў і пагаршэннем характарыстык рэагентаў.
Складнікі камплекта
| Склад камплекта ( 50 μL сістэма лізісу/20 мклRT сістэма рэакцыі /20μL рэакцыйная сістэма qPCR) | ДРТ-03011 | Заўвага | |
| 96T | |||
| часткаI | БуферCL | 5 мл | СотавыЛізіс |
| ForegeneПротеаза плюс II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| частка II | ДНКГумка | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Прамы qPCR Mix-СІБР | 1 мL × 2 | кПЦР | |
| 50× эталонны фарбавальнік ROX | 400мкл | ||
| РНКаза- БясплатнаddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mгадавы | 1 кавалак | 1 порцыя | |
*: Рэагент для лізісу DNA Eraser уваходзіць у частку II набору;Кампаненты Cell Lysis, RT і qPCR можна набыць асобна.
Асаблівасці і перавагі
■Проста і эфектыўна: з дапамогай тэхналогіі Cell Direct RT ўзоры РНК можна атрымаць усяго за 7 хвілін.
■ Попыт на выбарку невялікі, можна праверыць усяго 10 клетак.
■ Высокая прапускная здольнасць: ён можа хутка выяўляць РНК у клетках, культывуемых у 384, 96, 24, 12, 6-лункавых пласцінах.
■ DNA Eraser можа хутка выдаліць вызваленыя геномы, значна паменшыць уплыў на наступныя эксперыментальныя вынікі.
■ Аптымізаваная сістэма RT і qPCR робіць двухэтапную зваротную транскрыпцыю RT-PCR больш эфектыўнай, а ПЦР больш спецыфічнай і больш устойлівай да інгібітараў рэакцыі RT-PCR.
Прыкладанне камплекта
Сфера прымянення: культываванне клетак.
- РНК, вызваленая ў выніку лізісу ўзору: прымяняецца толькі да шаблону RT-qPCR гэтага набору.
- Набор можа быць выкарыстаны для наступных мэт: аналіз экспрэсіі генаў, праверка апасродкаванага siRNA эфекту сайленсінгу генаў, скрынінг лекаў і г.д.
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Частка I гэтага набору павінна захоўвацца ў 4℃;Частка II павінна захоўвацца пры -20 ℃.
Foregene Protease Plus II варта захоўваць пры 4℃, не замярзаць пры -20 ℃.
Рэагент 2×Direct qPCR Mix-Taqman трэба захоўваць пры -20℃у цемры;пры частым выкарыстанні яго таксама можна захоўваць у 4℃ для кароткачасовага захоўвання (выкарыстаць на працягу 10 дзён).
Прынцыпы распрацоўкі праймераў ПЦР у рэальным часе
Пярэдні буквар і адваротны буквар
Для ПЦР у рэжыме рэальнага часу дызайн праймера вельмі важны.Праймеры звязаны са спецыфічнасцю і эфектыўнасцю ПЦР-ампліфікацыі і могуць быць распрацаваны з улікам наступных прынцыпаў:
- Даўжыня буквара: 18-30 п.н.
- Змест ГХ: 40-60%.
- Значэнне Tm: праграмнае забеспячэнне для распрацоўкі Primer 5, можа даць значэнне Tm праймера.Значэнні Tm праймераў вышэй і ніжэй па плыні павінны быць як мага больш блізкімі.Таксама можна выкарыстоўваць формулу разліку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Пры правядзенні ПЦР у якасці тэмпературы адпалу звычайна выбіраецца тэмпература ніжэйшая за значэнне Tm праймера на 5 °C (адпаведнае павелічэнне тэмпературы адпалу можа павялічыць спецыфічнасць рэакцыі ПЦР).
- Праймеры і прадукты ПЦР:
- Даўжыня прадукту ПЦР-ампліфікацыі праймера пераважна складае 100-150 пн.
- Наколькі гэта магчыма, варта пазбягаць дызайнерскіх грунтовак у другаснай структурнай вобласці шаблону.
- Пазбягайце ўтварэння 2 ці больш камплементарных асноў паміж 3'-канцамі праймераў уверх і ўніз па плыні.
- Канцавая база праймера 3′ не можа прысутнічаць з 3 дадатковымі паслядоўнымі G або C.
- Самі праймеры не могуць мець дадатковыя структуры, інакш утворыцца шпількавая структура, якая ўплывае на ПЦР-ампліфікацыю.
- ATCG павінен быць размеркаваны як мага больш раўнамерна ў паслядоўнасці праймера, і варта пазбягаць 3'-тэрмінальнага падставы, паколькі T.
дадатак1: Сell DirectRT-кПЦР Камплект камплектат дадатак пакет
1. Раствор для лізісу клетак
| Раствор для лізісу клетак | |||
| Складнікі камплекта (24-лункавая сістэма лізіс / лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| часткая | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| часткаII | Сціральнік ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× эталонны фарбавальнік ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкцыі па эксплуатацыі:
