Набор для вылучэння агульнай РНК раслін. Набор для ачысткі агульнай РНК для раслін з нізкім утрыманнем поліцукрыдаў і поліфенолаў
Тэхнічныя характарыстыкі
50 Preps, 200 Preps
У камплекце выкарыстоўваецца спінавая калонка і формула, распрацаваныя Foregene, якія могуць эфектыўна здабываць агульную РНК высокай чысціні і высокай якасці з розных тканін раслін з нізкім утрыманнем поліцукрыдаў і поліфенолаў.Для ўзораў раслін з высокім утрыманнем поліцукрыдаў або поліфенолаў рэкамендуецца выкарыстоўваць набор Plant Total RNA Isolation Plus Kit для атрымання лепшых вынікаў экстракцыі РНК.У наборы ёсць калонка для ачысткі ДНК, якая можа лёгка выдаліць геномную ДНК з супернатанта і тканкавага лізата.Калонка толькі з РНК можа эфектыўна звязваць РНК.Набор можа апрацоўваць вялікую колькасць узораў адначасова.
Уся сістэма не ўтрымлівае РНКазы, таму вычышчаная РНК не будзе дэградаваць.Буфер PRW1 і буфер PRW2 могуць гарантаваць, што атрыманая РНК не забруджана бялком, ДНК, іёнамі і арганічнымі злучэннямі.
Складнікі камплекта
| Буфер PSL1, буфер PS, буфер PSL2 |
| Буфер PRW1, буфер PRW2 |
| ddH без РНКазы2О, калонка ачысткі ДНК |
| Слупок толькі РНК |
| Інструкцыя |
Асаблівасці і перавагі
■ Праца пры пакаёвай тэмпературы (15-25 ℃) на працягу ўсяго працэсу, без ледзяной ванны і нізкатэмпературнага цэнтрыфугавання.
■ Поўны набор без РНКазы, не трэба турбавацца аб дэградацыі РНК.
■ Калонка для ачысткі ДНК спецыяльна звязваецца з ДНК, так што набор можа выдаліць забруджванне геномнай ДНК без дадання ДНКазы.
■ Высокі выхад РНК: Калонка толькі РНК і ўнікальная формула могуць эфектыўна ачысціць РНК.
■ Высокая хуткасць: просты ў эксплуатацыі і можа быць выкананы на працягу 30 хвілін.
■ Бяспека: арганічны рэагент не патрабуецца.
■ Высокая якасць: вычышчаныя фрагменты РНК маюць высокую чысціню, не ўтрымліваюць бялку і іншых прымешак і могуць знайсці розныя эксперыментальныя магчымасці.
Прыкладанне камплекта
Ён падыходзіць для экстракцыі і ачысткі агульнай РНК са свежых або замарожаных узораў раслінных тканін (асабліва свежай тканіны лісця раслін) з нізкім утрыманнем поліцукрыдаў і поліфенолаў.
Працоўны працэс
Дыяграма
Plant Total RNA Isolation Kit Plus апрацаваў 50 мг свежых лісця поліцукрыдаў і поліфенолаў, і 5% вычышчанай РНК было праверана электрафарэзам.
1: Банан
2: Гінкго
3: Бавоўна
4: Гранат
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Набор можна захоўваць 12 месяцаў пры пакаёвай тэмпературы (15–25 ℃) у сухім асяроддзі і 2–8 ℃ больш працяглы час (24 месяцы).
Буфер PSL1 можна захоўваць пры тэмпературы 4 ℃ на працягу 1 месяца пасля дадання 2-гідраксі-1-этантыёлу (неабавязкова).
Кіраўніцтва па аналізе праблем
Наступны аналіз праблем, з якімі вы можаце сутыкнуццаЗавод УсягоRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Засмецілася спінавая калонка
Закаркаванне спінавай калонкі прывядзе да зніжэння выхаду РНК або нават немагчымасці яе ачысткі для атрымання РНК, і якасць атрыманай РНК будзе нізкай.
Аналіз агульнай прычыны:
1. Узор не парушаны цалкам.
Няпоўная фрагментацыя ўзору можа заблакаваць калонку ачысткі ДНК, што таксама можа паўплываць на выхад і якасць РНК.Мы рэкамендуем, каб пры выкананні фрагментацыі ўзору хутка здрабніць яго ў дастатковай колькасці вадкага азоту, каб максімальна разбіць тканіны, такія як клеткавыя сценкі і клеткавыя мембраны ўзораў.Для раслінных узораў поліфенольных поліцукрыдаў мы рэкамендуем вам выкарыстоўваць Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Аспіруйце ізаляваны супернатант калонкі для ачысткі ДНК, аспіруйце магчымы асадак клеткавага смецця.
Аспіраваны асадак клеткавага смецця можа закаркаваць калонку толькі з РНК падчас працэдур адсорбцыі РНК (гл. этап 5 працэдуры, этап 6 працэдуры поліцукрыдных поліфенолаў).Мы рэкамендуем выконваць асцярожнасць пры аспірацыі гэтага супернатанту, каб пазбегнуць аспірацыі рэшткаў клетак.
3. Першапачатковая колькасць выбаркі занадта вялікая.
Празмернае выкарыстанне ўзору прывядзе да няпоўнай фрагментацыі ўзору або няпоўнага лізісу клетак буферам PRL1 або буферам PSL1, што прывядзе да засмечвання ачышчальнай калонкі для аперацый ачысткі.Plant Total RNA Isolation Kit мае пачатковы максімум 50 мг на адну ачыстку апераванага ўзору.Для раслінных узораў поліфенольных поліцукрыдаў мы рэкамендуем вам паспрабаваць набор для вылучэння агульнай РНК расліны Plus.
4. Тэмпература цэнтрыфугі занадта нізкая.
Вылучэнне і ачыстка поўнай РНК, за выключэннем разбурэння ўзору тканіны вадкім азотам, усе этапы выконваюцца пры пакаёвай тэмпературы (20-25 °C).Некаторыя нізкатэмпературныя цэнтрыфугі маюць тэмпературу ніжэй за 20 °C, што можа выклікаць закаркаванне ў калонцы для ачысткі ДНК і/або калонцы толькі для РНК.Калі гэта адбываецца, усталюйце тэмпературу цэнтрыфугі на 20-25 °C і папярэдне нагрэйце сумесь для лізісу і/або даданне супернатанта для падзелу этанолу да 37 °C.
РНК не экстрагаваная або выхад РНК нізкі
Звычайна існуе шмат фактараў, якія ўплываюць на эфектыўнасць аднаўлення, такіх як: змест РНК у пробе, метад працы, аб'ём элюіравання і г.д.
Аналіз агульных прычын, як паказана ніжэй:
1. Падчас аперацыі праводзілі лазню з лёдам або цэнтрыфугаванне пры нізкай тэмпературы (4°C).
Прапанова: Працуйце пры пакаёвай тэмпературы (15-25°C) на працягу ўсяго працэсу, не выкарыстоўвайце ванну з лёдам і цэнтрыфугаванне пры нізкай тэмпературы.
2.РНК дэградавала з-за няправільнага захавання ўзору або працяглага захавання ўзору.
Рэкамендацыя: Свежесобранные ўзоры трэба хутка замарозіць у вадкім азоце, а затым захоўваць пры -80°C на працягу доўгага часу, пазбягаць паўторнага замарожвання і адтавання узораў;або неадкладна замачыць узоры ў растворы стабілізатара РНК RNAlater (узоры жывёл).
3.Недастатковая фрагментацыя пробы і лізіс прыводзяць да закаркаванні ачышчальнай калонкі.
Прапанова: пры драбненні тканіны пераканайцеся, што тканіна дастаткова здробнена, і хутка перанясіце яе ў загадзя падрыхтаваны буфер PSL1 (пераканайцеся, што была дададзена правільная прапорцыя β-ME, гл. крок 1 працэдуры).
4. Элюент быў дададзены няправільна.
Прапанова: пераканайцеся, што ddH без РНКазы2O капае ў сярэдзіну мембраны ачышчальнай калонкі.
5. Правільны аб'ём абсалютнага этанолу не быў дададзены ў буфер PSL2 або буфер PRW2.
Прапанова: выконвайце інструкцыі, дадайце патрэбны аб'ём абсалютнага этанолу ў буфер PSL2 і буфер PRW2 і добра змяшайце перад выкарыстаннем набору.
6. Колькасць узору тканіны недапушчальная.
Прапанова: выкарыстоўвайце 50 мг тканіны на 500 мкл буфера PSL1.Выкарыстанне занадта вялікай колькасці тканін прывядзе да памяншэння колькасці здабываемай РНК, і чысціня атрыманай РНК таксама паменшыцца.Мы настойліва рэкамендуем, каб першапачатковая доза ўзору не перавышала 50 мг на аперацыю экстракцыі РНК.
7. Неадпаведны аб'ём элюіравання або няпоўнае элюіраванне.
Прапанова: аб'ём элюента ачышчальнай калонкі складае 50-200 мкл;калі эфект элюіравання не з'яўляецца здавальняючым, рэкамендуецца падоўжыць час пры пакаёвай тэмпературы пасля дадання папярэдне нагрэтага ddH без РНКазы2O, напрыклад, 5-10 хвілін.
8. У ачышчальнай калоне ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам PRW2.
Прапанова: калі пустая прабірка цэнтрыфугуецца на працягу 1 хвіліны і ў ёй усё яшчэ застаецца этанол пасля прамывання ў буферы PRW2, вы можаце павялічыць час цэнтрыфугавання пустой прабіркі да 2 хвілін або паставіць ачышчальную калонку пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін, каб цалкам выдаліць рэшткі этанолу.
9. Камплект выкарыстоўваўся няправільна.
Прапанова: для раслінных узораў поліфенольных поліцукрыдаў выкарыстанне звычайных набораў, такіх як Plant Total RNA Isolation Kit, можа не даць магчымасці атрымаць ідэальныя ўзоры РНК.Мы рэкамендуем вам выкарыстоўваць Plant Total RNA IsolationKit Plus, які спецыяльна распрацаваны для раслінных узораў поліфенольных поліцукрыдаў.Набор, спецыяльна распрацаваны для экстракцыі РНК з узораў поліфенолаў і поліцукрыдаў раслін.
Значэнне OD260/OD280 нізкае
Элюцыя РНК з ddH2O і выкарыстоўваецца для паказанняў спектрафатометры прыводзіць да нізкіх значэнняў OD260/OD280.Мы рэкамендуем выкарыстоўваць 10 мМ трыс-HCl, pH 7,5 (замест ddH без РНКазы2O для элюіравання РНК), каб атрымаць адносна правільныя значэнні OD260/OD280, гл. «Аналізы канцэнтрацыі і ачысткі РНК» на старонцы 19.
Вычышчаная РНК дэградуе
Якасць вычышчанай РНК звязана з такімі фактарамі, як захаванне ўзору, заражэнне РНКазой і маніпуляцыі.
Аналіз агульных прычын:
1. Узоры тканін не захоўваліся своечасова пасля збору.
Рэкамендацыя: калі ўзоры тканін не былі выкарыстаны своечасова пасля збору, неадкладна захоўвайце іх у вадкім азоце пры нізкай тэмпературы або перанясіце іх пры тэмпературы -80°C для працяглага захоўвання пасля хуткага замарожвання ў вадкім азоце, або неадкладна пагрузіце ўзоры ў раствор стабілізатара РНК RNAlater (узоры жывёл).Для экстракцыі РНК паспрабуйце выкарыстоўваць свежесобранные ўзоры тканін.
2.Паўторнае замарожванне і адтаванне узораў тканін.
Прапанова: пры захоўванні ўзораў тканіны лепш разрэзаць іх на невялікія кавалкі для захавання і выняць частку пры выкарыстанні, каб пазбегнуць дэградацыі РНК, выкліканай шматразовым замарожваннем і адтаваннем узораў.
3. РНКазу ўводзяць у аперацыйнай або не надзяваюць аднаразовыя пальчаткі, маскі і інш.
Прапанова: Эксперыменты па экстракцыі РНК лепш за ўсё праводзіць у асобных аперацыях РНК, а лабараторны стол перад эксперыментам трэба ачысціць, а падчас эксперыменту трэба насіць аднаразовыя пальчаткі і маскі, каб у найбольшай ступені пазбегнуць дэградацыі РНК, выкліканай увядзеннем РНКазы.
4. Рэагент забруджваецца РНКазой падчас выкарыстання.
Прапанова: замяніць на новую серыю набораў для экстракцыі сумарнай РНК раслін для адпаведных эксперыментаў.
5. Цэнтрыфужныя прабіркі і наканечнікі піпетак, якія выкарыстоўваюцца для маніпуляцый РНК, забруджаныя РНКазой.
Прапанова: пераканайцеся, што цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі піпетак, піпеткі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры экстракцыі РНК, не ўтрымліваюць РНКазы.
Інструкцыі па эксплуатацыі:
Кіраўніцтва па эксплуатацыі набору для выдзялення агульнай РНК раслін
