Набор Cell Direct RT qPCR — Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Наборы аднаэтапнай qRT-PCR Probe
Апісанні
У гэтым прадукце выкарыстоўваецца унікальная буферная сістэма лізісу для хуткага вызвалення РНК з узораў культывуемых клетак для рэакцый RT-qPCR, ухіляючы працаёмкі і працаёмкі працэс ачысткі РНК і ўсяго 7 хвілін, каб атрымаць неабходны шаблон РНК, з дапамогай 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman, якія ўваходзяць у камплект, можа хутка і эфектыўна атрымаць колькасныя вынікі ПЦР у рэальным часе.
5× Direct RT Mix і 2× Direct qPCR Mix-Taqman маюць моцную талерантнасць да інгібітараў і могуць выконваць эфектыўную рэверсію і спецыфічную ампліфікацыю з выкарыстаннем лізата ўзору для вымярэння ў якасці шаблону.Рэагент змяшчае зваротную транскрыптазу Foregene, ДНК-палімеразу Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2, буфер рэакцыі, аптымізатар і стабілізатар ПЦР, які можа выкарыстоўвацца з буферам лізісу для хуткага і лёгкага выяўлення ўзораў і мае характарыстыкі высокай адчувальнасці, спецыфічнасці і стабільнасці.
Тэхнічныя характарыстыкі
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Складнікі камплекта
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Складнікі камплекта 20 мкл рэакцыйная сістэма qPCR | DRT-01021 | DRT-01022 | Нататка | |
| 200 т | 1000 т | |||
|
частка I | Буфер CL | 4 мл | 20 мл | Лізіс клетак |
| Foregene Protease Plus II | 80 мкл | 400 мкл | ||
| Буфер ST | 400 мкл | 1 мл × 2 | ||
|
частка II | Сціральнік ДНК | 80 мкл | 400 мкл | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 мкл | 800 мкл | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 | кПЦР | |
| 20×ROX эталонны фарбавальнік | 40 мкл | 200 мкл | ||
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл | ||
| Кіраўніцтва па эксплуатацыі | 1 шт | 1 шт | ||
*:Лізіс клетак, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman можна набыць асобна
Асаблівасці і перавагі
■Проста і эфектыўна: з дапамогай тэхналогіі Cell Direct RT ўзоры РНК можна атрымаць усяго за 7 хвілін.
■ Попыт на выбарку невялікі, можна праверыць усяго 10 клетак.
■ Высокая прапускная здольнасць: ён можа хутка выяўляць РНК у клетках, культывуемых у 384, 96, 24, 12, 6-лункавых пласцінах.
■ DNA Eraser можа хутка выдаліць вызваленыя геномы, значна паменшыць уплыў на наступныя эксперыментальныя вынікі.
■ Аптымізаваная сістэма RT і qPCR робіць двухэтапную зваротную транскрыпцыю RT-PCR больш эфектыўнай, а ПЦР больш спецыфічнай і больш устойлівай да інгібітараў рэакцыі RT-PCR.
Прыкладанне камплекта
Сфера прымянення: культываванне клетак.
- РНК, вызваленая ў выніку лізісу ўзору: прымяняецца толькі да шаблону RT-qPCR гэтага набору.
- Набор можа быць выкарыстаны для наступных мэт: аналіз экспрэсіі генаў, праверка апасродкаванага siRNA эфекту сайленсінгу генаў, скрынінг лекаў і г.д.
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Частка I гэтага набору павінна захоўвацца ў 4℃;Частка II павінна захоўвацца пры -20 ℃.
Foregene Protease Plus II варта захоўваць пры 4℃, не замярзаць пры -20 ℃.
Рэагент 2×Direct qPCR Mix-Taqman трэба захоўваць пры -20℃у цемры;пры частым выкарыстанні яго таксама можна захоўваць у 4℃ для кароткачасовага захоўвання (выкарыстаць на працягу 10 дзён).
Прынцыпы распрацоўкі праймераў ПЦР у рэальным часе
Пярэдні буквар і адваротны буквар
Для ПЦР у рэжыме рэальнага часу дызайн праймера вельмі важны.Праймеры звязаны са спецыфічнасцю і эфектыўнасцю ПЦР-ампліфікацыі і могуць быць распрацаваны з улікам наступных прынцыпаў:
- Даўжыня буквара: 18-30 п.н.
- Змест ГХ: 40-60%.
- Значэнне Tm: праграмнае забеспячэнне для распрацоўкі Primer 5, можа даць значэнне Tm праймера.Значэнні Tm праймераў вышэй і ніжэй па плыні павінны быць як мага больш блізкімі.Таксама можна выкарыстоўваць формулу разліку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Пры правядзенні ПЦР у якасці тэмпературы адпалу звычайна выбіраецца тэмпература ніжэйшая за значэнне Tm праймера на 5 °C (адпаведнае павелічэнне тэмпературы адпалу можа павялічыць спецыфічнасць рэакцыі ПЦР).
- Праймеры і прадукты ПЦР:
- Даўжыня прадукту ПЦР-ампліфікацыі праймера пераважна складае 100-150 пн.
- Наколькі гэта магчыма, варта пазбягаць дызайнерскіх грунтовак у другаснай структурнай вобласці шаблону.
- Пазбягайце ўтварэння 2 ці больш камплементарных асноў паміж 3'-канцамі праймераў уверх і ўніз па плыні.
- Канцавая база праймера 3′ не можа прысутнічаць з 3 дадатковымі паслядоўнымі G або C.
- Самі праймеры не могуць мець дадатковыя структуры, інакш утворыцца шпількавая структура, якая ўплывае на ПЦР-ампліфікацыю.
- ATCG павінен быць размеркаваны як мага больш раўнамерна ў паслядоўнасці праймера, і варта пазбягаць 3'-тэрмінальнага падставы, паколькі T.
дадатак1: Сell DirectRT-кПЦР Камплект камплектат дадатак пакет
1. Раствор для лізісу клетак
| Раствор для лізісу клетак | |||
| Складнікі камплекта (24-лункавая сістэма лізіс / лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| часткая | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
| Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
| часткаII | Сціральнік ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
| RT Mix | |
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Direct RT Mix | 800 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
| 20× эталонны фарбавальнік ROX | 40 мкл | 200 мкл |
| ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |
Інструкцыі па эксплуатацыі:
