QuickEasyᵀᴹ ПЦР у рэальным часе Kit-Taqman
Апісанні
2× QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman ад QuickEasyTMНабор Taqman для ПЦР у рэальным часе - гэта сістэма майстар-міксу новага пакалення, прызначаная для рэакцыі ампліфікацыі ПЦР у рэальным часе з выкарыстаннем спецыяльных флуоресцентных зондаў.Яго асноўная ДНК-палімераза Foregene HS Taq заснавана на мадыфікацыі антыцелаў, выкарыстоўваецца ў спалучэнні з дадаткова аптымізаванай сістэмай ПЦР Foregene, мае больш высокую спецыфічнасць і эфектыўнасць ампліфікацыі.У параўнанні са звычайнай сумессю ПЦР, яна мае больш моцную здольнасць да ампліфікацыі і меншы ўзровень несупадзення.Яго можна выкарыстоўваць у колькаснай рэакцыі ПЦР па флуарэсцэнцыі для памяншэння неспецыфічнай ампліфікацыі і павышэння дакладнасці ПЦР.Гэта можа значна палепшыць спецыфічнасць прадукту і адчувальнасць рэакцыі.У той жа час ROX быў прадстаўлены ў якасці ўнутранага эталоннага фарбавальніка.
QuickEasyTMНабор Taqman для ПЦР у рэальным часе мае шырокую сферу прымянення ў колькасці шаблону і можа атрымаць добрую стандартную крывую ў розных колькасных рэгіёнах, а таксама можа дакладна колькасна вызначаць і выяўляць мэтавыя гены з добрай паўтаранасцю і высокай упэўненасцю.
Тэхнічныя характарыстыкі
200 падрыхтоўкі,500 падрыхтоўкі,1000 падрыхтоўкі,2000 падрыхт
Складнікі камплекта
QuickEasyTMНабор для ПЦР у рэжыме рэальнага часу - Taqman(20мклсістэма) | ||||
Змест камплекта | QP-01121 | QP-01122 | QP-01123 | QP-01124 |
200 падрыхт | 500 падрыхт | 1000 падрыхт | 2000 падрыхт | |
2×хуткалёгкаTM Сапраўдная ПЦР Змяшаць-Такман | 1 мл×2 | 1,7 мл×3 | 1,7 мл×6 | 1,7 мл×12 |
20×Эталонны фарбавальнік ROX | 200мкл | 0,5 мл | 1 мл | 1 мл×2 |
ddH без ДНКаз2O | 1,7 мл | 1,7 мл×2 | 10 мл | 20 мл |
IFU | 1кавалак | 1кавалак | 1кавалак | 1кавалак |
Асаблівасці і перавагі
■ Унікальная сістэма аптымізацыі ПЦР робіць 2×QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman больш сумяшчальны.
■ Палімераза Foregene HS Taq з гарачым стартам мае больш высокую эфектыўнасць узмацнення, больш высокую адчувальнасць узмацнення і больш высокую спецыфічнасць узмацнення.
■ 2× QuickEasyTM Real PCR Mix -Taqman выкарыстоўвае унікальную сістэму, аптымізаваную Foregene для павышэння адчувальнасці і спецыфічнасці выяўлення зонда, які залежыць ад паслядоўнасці, які можа выкарыстоўвацца для генатыпавання і вызначэння варыяцый колькасці копій і атрымання дакладных вынікаў.
■ Гэты прадукт пастаўляецца з унутраным эталонным фарбавальнікам ROX, які можа быць выкарыстаны для ліквідацыі фону сігналу і памылкі сігналу паміж лункамі, што зручна для выкарыстання кліентамі ў розных тыпах колькасных ПЦР-прыбораў.
Прыкладанне камплекта
■ Флуарэсцэнтная колькасная ПЦР для колькаснага аналізу па шаблоне;
■ Cтрадыцыйная ПЦР-амплификация;
■ Можа выкарыстоўвацца для выяўлення алеляў.
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Набор варта захоўваць пры тэмпературы -20°C у цёмным месцы;калі ён выкарыстоўваецца часта, яго таксама можна захоўваць пры тэмпературы 4°C на працягу кароткага перыяду часу (выкарыстаць на працягу 10 дзён).
Прынцыпы распрацоўкі праймераў ПЦР у рэальным часе
Пярэдні буквар і адваротны буквар
Для ПЦР у рэжыме рэальнага часу дызайн праймера вельмі важны.Праймеры звязаны са спецыфічнасцю і эфектыўнасцю ПЦР-ампліфікацыі і могуць быць распрацаваны з улікам наступных прынцыпаў:
Даўжыня буквара: 18-30 п.н.
Змест ГХ: 40-60%.
Значэнне Tm: праграмнае забеспячэнне для распрацоўкі Primer 5, можа даць значэнне Tm праймера.Значэнні Tm праймераў вышэй і ніжэй па плыні павінны быць як мага больш блізкімі.Таксама можна выкарыстоўваць формулу разліку Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Пры правядзенні ПЦР у якасці тэмпературы адпалу звычайна выбіраецца тэмпература ніжэйшая за значэнне Tm праймера на 5 °C (адпаведнае павелічэнне тэмпературы адпалу можа павялічыць спецыфічнасць рэакцыі ПЦР).
Праймеры і прадукты ПЦР:
Даўжыня прадукту ПЦР-ампліфікацыі праймера пераважна складае 100-150 пн.
Наколькі гэта магчыма, варта пазбягаць дызайнерскіх грунтовак у другаснай структурнай вобласці шаблону.
Пазбягайце ўтварэння 2 ці больш камплементарных асноў паміж 3'-канцамі праймераў уверх і ўніз па плыні.
Канцавая база праймера 3′ не можа прысутнічаць з 3 дадатковымі паслядоўнымі G або C.
Самі праймеры не могуць мець дадатковыя структуры, інакш утворыцца шпількавая структура, якая ўплывае на ПЦР-ампліфікацыю.
ATCG павінен быць размеркаваны як мага больш раўнамерна ў паслядоўнасці праймера, і варта пазбягаць 3'-тэрмінальнага падставы, паколькі T.
Дадатак 1: дадатковы пакет кампанентаў Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Раствор для лізісу клетак
| |||
Складнікі камплекта (24-лункавая сістэма лізіс / лунка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 т | 500 т | ||
часткая | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
Foregene Protease Plus II | 400 мкл | 1 мл × 2 | |
Буфер ST | 1 мл × 2 | 10 мл | |
часткаII | Сціральнік ДНК | 400 мкл | 1 мл × 2 |
2.RT Mix
| |
Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-B1 |
200 т | |
5× Direct RT Mix | 800 мкл |
ddH без РНКазы2O | 1,7 мл × 2 |
| ||
Складнікі камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
200 т | 1000 т | |
2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 мл × 2 | 1,7 мл × 6 |
50× эталонны фарбавальнік ROX | 40 мкл | 200 мкл |
ddH без РНКазы2O | 1,7 мл | 10 мл |