Букальны тампон/карта FTA Набор для вылучэння ДНК Набор для экстракцыі або ачысткі геномнай ДНК з буккальных мазкоў
Апісанне камплекта:
Хутка ачысціце высакаякасную геномную ДНК з узораў буккального мазка/карткі FTA.
◮Няма забруджвання РНКазой:Калонка толькі для ДНК, якая ўваходзіць у камплект, дазваляе выдаліць РНК з геномнай ДНК без дадання РНКазы падчас эксперыменту, прадухіляючы забруджванне лабараторыі экзагеннай РНКазай.
◮Высокая хуткасць:Foregene Protease мае больш высокую актыўнасць, чым аналагічныя пратэазы, і хутка пераварвае ўзоры тканін;аперацыя простая, і аперацыя экстракцыі геномнай ДНК можа быць завершана на працягу 20-80 хвілін.
◮Зручна:Цэнтрыфугаванне праводзіцца пры пакаёвай тэмпературы, і няма неабходнасці ў цэнтрыфугаванні пры нізкай тэмпературы 4°C або асаджванні ДНК этанолам.
◮Бяспека:Экстракцыя арганічных рэагентаў не патрабуецца.
◮Высокая якасць:Вынятая геномная ДНК мае вялікія фрагменты, без РНК і РНКазы і надзвычай нізкім утрыманнем іёнаў, што можа адпавядаць патрабаванням розных эксперыментаў.
◮Сістэма мікраэлюцыі:Гэта можа павялічыць канцэнтрацыю геномнай ДНК, што зручна для далейшага выяўлення або эксперыментаў.
Апісанне
Гэты набор забяспечвае эфектыўны і хуткі метад атрымання геномнай ДНК высокай канцэнтрацыі з буккальных мазкоў і карты FTA (плямы крыві).З дапамогай нашай кампаніі'Унікальная спінавая калонка і формула з крэмніевай мембранай, якая змяшчае толькі ДНК, у спалучэнні з пратэазай Foregene, высокую канцэнтрацыю геномнай ДНК высокай якасці можна вылучыць за 80 хвілін.Спецыяльна распрацаваная невялікая ачышчальная калонка звязвае геномную ДНК, і ДНК можа быць элюіравана невялікай колькасцю (15 мкл) сістэмы элюіравання для павелічэння канцэнтрацыі атрыманай геномнай ДНК, што зручна для далейшага выяўлення або эксперыменту.Набор можа апрацоўваць адну або некалькі проб адначасова, і працэс ачысткі не патрабуе экстракцыі арганічных рэчываў, такіх як фенол, хлараформ, і працаёмкага асаджэння ізапрапанолам або этанолам, а аперацыя простая і эканоміць час.
Тэхнічныя характарыстыкі
50 падрыхт
Складнікі камплекта
| Буфер ST1 |
| Буфер ST2 |
| Лінейны акрыламід |
| Буфер PW |
| Буфер WB |
| Буфер ЭБ |
| Foregene Protease |
| Слупок толькі ДНК |
| Інструкцыя |
Асаблівасці і перавагі
- Адсутнасць забруджвання РНКазой: Калонка толькі для ДНК, якая ўваходзіць у камплект, дазваляе выдаліць РНК з геномнай ДНК без дадання РНКазы падчас эксперыменту, пазбягаючы забруджвання лабараторыі экзагеннай РНКазай.
-Высокая хуткасць: Foregene Protease мае больш высокую актыўнасць, чым аналагічныя пратэазы, хутка засвойвае ўзоры;простая эксплуатацыя.
- Зручна: цэнтрыфугаванне праводзіцца пры пакаёвай тэмпературы, і няма неабходнасці ў цэнтрыфугаванні пры нізкай тэмпературы 4°C або асаджванні ДНК этанолам.
-Бяспека: экстракцыя арганічных рэагентаў не патрабуецца.
-Высокая якасць: вынятая геномная ДНК мае вялікія фрагменты, без РНК, без РНКазы і надзвычай нізкім утрыманнем іёнаў, што можа адпавядаць патрабаванням розных эксперыментаў.
-Сістэма мікраэлюцыі: яна можа павялічыць канцэнтрацыю геномнай ДНК, што зручна для далейшага выяўлення або эксперыменту.
Прыкладанне камплекта
Ён падыходзіць для ачысткі геномнай ДНК з наступных узораў: буккальных мазкоў, карты FTA (плямы крыві).
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
-Гэты набор можа захоўвацца 12 месяцаў у сухіх умовах пры пакаёвай тэмпературы (15-25°C);калі яго трэба захоўваць на працягу больш доўгага перыяду часу, яго можна захоўваць пры тэмпературы 2-8°C.
Заўвага: калі захоўваць пры нізкай тэмпературы, раствор схільны да выпадзення асадка.Перад выкарыстаннем не забудзьцеся змясціць раствор у камплекце пры пакаёвай тэмпературы на некаторы час.Пры неабходнасці прагрэйце яго на вадзяной лазні пры тэмпературы 37°C на працягу 10 хвілін для растварэння асадка і змяшайце перад выкарыстаннем.
- Раствор Foregene Protease валодае унікальнай формулай, якая актыўная пры працяглым захоўванні пры пакаёвай тэмпературы (3 месяцы);яго актыўнасць і стабільнасць будуць лепшымі пры захоўванні пры тэмпературы 4°C, таму рэкамендуецца захоўваць яго пры 4°C, памятайце, што нельга захоўваць яго пры -20°C.
Засмечана ачышчальная калона
У гэтым наборы падчас аперацыі экстракцыі геномнай ДНК ачышчальная калонка непасрэдна адсарбуецца на сумесі ферментатыўнага лізісу ўзору без этапу цэнтрыфугавання, і ачышчальная калонка можа быць заблакаваная з-за няпоўнай ферментацыі і высокай глейкасці ўзору.
Наступныя магчымыя прычыны:
1. Няпоўнае ферментатыўнае расшчапленне узораў тканін.
Рэкамендацыя: час апрацоўкі ўзору Foregene Protease можа быць адпаведным чынам падоўжаны або супернатант можна ўзяць пасля цэнтрыфугавання пры 12 000 абаротаў у хвіліну (~13 400 × g) на працягу 5 хвілін.
2. Празмернае выкарыстанне узораў тканін або вялікіх тканін.
Рэкамендацыя: лепш не перавышаць 1 буккальны мазок ва ўзоры;калі ўзор занадта вялікі, адпаведна павялічце дазоўку буфера ST1, Foregene Protease, буфера ST2.
3. Глейкасць узору занадта высокая.
Рэкамендацыя: перад экстракцыяй геномнай ДНК пробы можна адпаведным чынам разбавіць 10 мМ трыс-HCl.
4. Фрагменты карты крыві былі высмактаныя.
Рэкамендацыя: пераходны час цэнтрыфугавання этапу 6 геномнай экстракцыі плямы крыві (FTA Card) можа быць адпаведным чынам падоўжаны.
Нізкі ўраджай або адсутнасць ДНК
Часта існуе мноства фактараў, якія ўплываюць на выхад геномнай ДНК, у тым ліку паходжанне ўзору, умовы захоўвання ўзору, падрыхтоўка ўзору, маніпуляцыі і г.д.
Геномную ДНК нельга атрымаць падчас экстракцыі
Магчымыя прычыны:
1. Няправільнае захаванне ўзораў або занадта доўгае захоўванне прыводзіць да дэградацыі геномнай ДНК.
Рэкамендацыя: мазкі з паражніны рота пажадана браць свежыя, і не пажадана выкарыстоўваць кансерваваныя мазкі для аперацый па экстракцыі геномнай ДНК;Узоры плям крыві павінны гарантаваць кваліфікаваную якасць і час захоўвання не павінен быць занадта доўгім.
2. Занадта малае выкарыстанне тканіны можа прывесці да адсутнасці экстракцыі адпаведнай геномнай ДНК.
Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі па ўзяцці мазка з ротавай паражніны ў кіраўніцтве па эксплуатацыі і працірайце столькі разоў, колькі магчыма, каб дастатковую колькасць клетак можна было прымацаваць да тампона з ротавай паражніны для экстракцыі геномнай ДНК;для здабывання ўзору плямы крыві плошчу выразання плямы крыві можна адпаведным чынам павялічыць.
3. Foregene Protease няправільна захоўваецца, што прыводзіць да зніжэння яе актыўнасці або інактывацыі.
Рэкамендацыя: праверце ўмовы захоўвання Foregene Protease або заменіце яе новай Foregene Protease для ферментатыўнай рэакцыі.
4. Няправільнае захаванне камплекта або занадта доўгі час захоўвання, што прыводзіць да выхаду з ладу некаторых кампанентаў камплекта.
Рэкамендацыя: набудзьце новы камплект для вылучэння ДНК для буккальнага мазка для адпаведных працэдур.
5. Буфер WB не дадае абсалютны этанол.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што буфер WB дадае правільны аб'ём абсалютнага этанолу.
6. Элюент няправільна дададзены ў сіліконавую плёнку.
Рэкамендацыя: дадайце кроплі папярэдне разагрэтага элюента да 65 °C у сярэдзіну сіліконавай мембраны і пакіньце пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін для павышэння эфектыўнасці элюіравання.
Выдзелена геномная ДНК з нізкім ураджаем
Наступныя магчымыя прычыны:
1. Няправільнае захаванне ўзораў або занадта доўгае захоўванне прыводзіць да дэградацыі геномнай ДНК.
Рэкамендацыя: мазкі з паражніны рота пажадана браць свежыя, а захаваныя мазкі не варта выкарыстоўваць для экстракцыі геномнай ДНК.
2. Калі колькасць узору тканіны занадта малая, утрыманне вынятай геномнай ДНК будзе менш.
Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі па ўзяцці мазка з ротавай паражніны ў кіраўніцтве па эксплуатацыі, праціраючы столькі разоў, колькі магчыма, каб дастатковую колькасць клетак можна было прымацаваць да мазка з ротавай паражніны для экстракцыі геномнай ДНК.
3. Foregene Protease няправільна захоўваецца, што прыводзіць да зніжэння яе актыўнасці або інактывацыі.
Рэкамендацыя: праверце ўмовы захоўвання Foregene Protease або заменіце яе новай Foregene Protease для ферментатыўнай рэакцыі.
4. Праблемы элюента.
Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце буфер EB для элюіравання;пры выкарыстанні ddH2O або іншыя элюенты, пацвердзіце, што pH элюата знаходзіцца ў межах 7,0-8,5.
5. Элюат няправільна дададзены па кроплях.
Рэкамендацыя: дадайце кроплі элюента ў сярэдзіну сіліконавай мембраны і пакіньце пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін для павышэння эфектыўнасці элюіравання.
6. Элюирующая вадкасць назапашваецца занадта мала.
Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце элюент для элюцыі геномнай ДНК у адпаведнасці з патрабаваннямі ў інструкцыі, па меншай меры, не менш за 15 мкл.
Нізкая чысціня выдзеленай геномнай ДНК
Нізкая чысціня геномнай ДНК можа прывесці да няўдачы або нездавальняючых вынікаў далейшых эксперыментаў, такіх як: ферменты не могуць быць раскрытыя, ПЦР не можа атрымаць цікавы фрагмент гена і г.д.
Магчымыя прычыны:
1. Забруджванне гетэрапратэінамі, забруджванне РНК.
Аналіз: ачышчальную калонку не прамывалі буферам PW;калона ачысткі прамывання буферам PW не была прамыта з выкарыстаннем правільнай цэнтрабежнай хуткасці.
Рэкамендацыя: перад даданнем этанолу пераканайцеся, што ў супернатанте няма ападкаў;абавязкова прамыйце ачышчальную калонку ў адпаведнасці з інструкцыяй, і гэты этап нельга прапускаць.
2. Забруджванне іёнамі прымешак.
Аналіз: Калонка для ачысткі прамывання буферам WB была прапушчана або прамыта толькі адзін раз, што прывяло да рэшткавага іённага забруджвання.
Рэкамендацыя: не забудзьцеся прамыць Buffer WB 2 разы ў адпаведнасці з указаннямі, каб як мага больш выдаліць рэшткавыя іёны.
3. Заражэнне ферментам РНК.
Аналіз: чужародныя РНКазы былі дададзены ў буфер;Аперацыя прамывання буфера PW была няправільнай, што прывяло да з'яўлення рэшткаў РНКазы, што паўплывала на эксперыментальныя аперацыі РНК ніжэй па плыні, такія як транскрыпцыя in vitro.
Рэкамендацыя: Наборы для выдзялення нуклеінавых кіслот серыі Foregene могуць выдаляць РНК без дадатковага дадання РНКазы, такім чынам, набор для выдзялення ДНК з буккальнага мазка/карты FTA не патрабуе дадання РНКазы;не забудзьцеся прытрымлівацца інструкцый для ачышчальнай калонкі для прамывання буфера PW, і гэты крок нельга прапусціць.
4. Астатак этанолу.
Аналіз: Buffer WB не праводзіў цэнтрыфугаванне пустой прабіркі пасля прамывання ачышчальнай калонкі.
Рэкамендацыя: выканайце правільную аперацыю цэнтрыфугавання пустой прабіркі ў адпаведнасці з інструкцыямі.
5. Іншыя забруджвання прымешкамі.
Аналіз: захаваныя або спецыяльныя ўзоры не апрацоўваюцца.
Рэкамендацыя: Старанна папярэдне апрацуйце ўзор у адпаведнасці з інструкцыямі.
