Прамая RT-qPCR Kit II
Апісанне камплекта:
◮Набор Direct RT-qPCR, які выкарыстоўвае зваротную транскрыптазу Foreasy і ДНК-палімеразу Foreasy HS Taq, распрацаваныя Foregene, з унікальным буферам рэакцыі робіць гэты набор моцнай устойлівасцю і сумяшчальнасцю, і ён можа непасрэдна праверыць рэакцыю з выкарыстаннем сістэмы Foregene Lysis у якасці шаблону.Гэты набор можа прымяняцца для распрацоўкі набораў для выяўлення нуклеінавых кіслот COVID-19 і іншых патагенных бактэрый.
Апісанне
Набор Direct RT-qPCR забяспечвае асобна ўпакаваны буфер RT-qPCR, высокаэфектыўную ДНК-палімеразу Foreasy HS Taqі зваротная транскрыптаза Foreasy (MMLV),што робіць яго зручным для стварэння бэк-энд камплектаў і налады сістэмы, у рамках простай праверкі.
Набор Direct RT-qPCR, які выкарыстоўвае зваротную транскрыптазу Foreasy і ДНК-палімеразу Foreasy HS Taq, распрацаваныя Foregene, з унікальным буферам рэакцыі робіць гэты набор моцнай устойлівасцю і сумяшчальнасцю, і ён можа непасрэдна праверыць рэакцыю з выкарыстаннем сістэмы Foregene Lysis у якасці шаблону.Гэты набор можа прымяняцца для распрацоўкі набораў для выяўлення нуклеінавых кіслот COVID-19 і іншых патагенных бактэрый.
Гэты набор можа быць непасрэдна кампанентам IVD прадукту, які выкарыстоўваецца лёгка і хутка.Гэта патрабуе толькі лёгкай праверкі, без паўторнага развіцця.
Тэхнічныя характарыстыкі
500T, 50 000T
Складнікі камплекта
| Змест камплекта (рэакцыйная сістэма 20 мкл) | ІМ-05111-02 | ІМ-05112-02 |
| 500 т | 50 000 т | |
| Форы Рзваротная транскрыптаза (200 ЕД/μL) | 50 мкл×1 | 1 мл×5 |
| ДНК-палімераза Foreasy HS Taq (5 U/μL) | 100 мкл×1 | 1 мл×10 |
| 2× Прамая RT-кПЦРБуфер | 1 мл × 5 | 500 мл ×1 |
| Інструкцыя | 1 | 1 |
Этапы працы
A: Падрыхтуйце шаблон і рэагент
1. Падрыхтуйце падрыхтаваны шаблон РНК (рэкамендуецца выкарыстоўваць камплект Foregene Total RNA Isolation Kit для экстракцыі і ачысткі шаблона РНК) або прадукт крэкінгу ўзору (рэкамендуецца выкарыстоўваць сістэму Foregene Lysis), спецыяльныя праймеры (10 мкМ) і іншыя адпаведныя расходныя матэрыялы, інструмент.
2. Змесціце буфер 2× Direct RT-qPCR, ddH2O без РНКазы і 20× эталонны фарбавальнік ROX (калі ён неабходны) у скрынку з лёдам, каб яны расталі натуральным чынам, і асцярожна змяшайце.
B: Падрыхтоўка сістэмы RT-qPCR
Атрымайце палову аб'ёму рэакцыйнага буфера рэакцыйнай сістэмы (напрыклад, калі аб'ём сістэмы складае 20 мкл, трэба атрымаць 10 мкл 2 × прамога буфера RT-qPCR). Дляадпаведную колькасць фермента, мы прапануем гэтаM-MLV: рэакцыйная сістэма 10-30 U/20 мкл,TaqДНК-палімераза:1-2 ЕД/20 мкл рэакцыйная сістэмагэта наша прапанова, вы павінны праверыць і наладзіць яго), дадайце шаблон РНК, спецыфічныя праймеры і зонды і дадайце ddH без РНКазы2O да 20 мкл.Спецыфічная падрыхтоўка рэакцыйнай сістэмы RT-qPCR можа быць апісана ў наступнай табліцы 1.
Табліца 1: Падрыхтоўка сістэмы RT-qPCR
| Кампанент | Аб'ём | Канчатковая канцэнтрацыя |
| 2 × прамы буфер RT-qPCR | 10 мкл | 1× |
| Зваротная транскрыптаза Foreasy (MMLV) | 10-30 U | |
| ДНК-палімераза Foreasy HS Taq | 1-2 U | |
| Праймер (10 мкМ) | 0,8 мкл | 50-900 нм |
| Зваротны праймер (10 мкМ) | 0,8 мкл | 50-900 нм |
| Зонд (4 мкМ) | 1 мкл | 200 нМ |
| Шаблон (РНК або лізат) | X мкл | |
| 20× эталонны фарбавальнік ROX | - | 1* |
| РНКаза-FreeddH2O | (6,4-Х) мкл | |
| Агульны аб'ём | 20 мкл |
Заўвага: прамы праймер і адваротны праймер - гэта спецыфічныя праймеры мэтавага гена.Сістэма qPCR можа быць скарэкціравана ў адпаведнасці з практычнымі эксперыментальнымі і PCR мадэлямі.Мы рэкамендуем 400 нМ для канчатковай канцэнтрацыі большасці праймераў.Адрэгулюйце аб'ём канкрэтных праймераў і зондаў у адпаведнасці з падрыхтаванай канцэнтрацыяй і рэкамендаванай канчатковай канцэнтрацыяй, калі ласка.
1*: Выберыце прыдатную канчатковую канцэнтрацыю эталоннага фарбавальніка ROX у адпаведнасці з рознымі прыборамі колькаснай ПЦР.Аптымальная канцэнтрацыя эталоннага фарбавальніка ROX для звычайных колькасных прыбораў ПЦР паказана ў наступнай табліцы:
| Прыборы для колькаснай ПЦР | Канчатковая канцэнтрацыя эталоннага фарбавальніка ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Крок першы,г.д. | 1× (напрыклад, дадайце 1 мкл 20×ROX Reference Dye у 20 мкл рэакцыйнай сістэмы) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P і Mx4000 і інш. | 0,5× (напрыклад, дадайце 0,5 мкл 20×ROX Reference Dye у 20 мкл рэакцыйнай сістэмы) |
| ПЦР-прыбор Roche, ПЦР-прыбор Bio-Rad, колькасны ПЦР-прыбор Eppendorf і інш. | Без эталоннага фарбавальніка ROX |
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
Набор трэба захоўваць пры -20 ± 5 ℃.Яго трэба неадкладна захоўваць у тэрмастатычным халадзільніку -20 ℃.Тэрмін прыдатнасці - 2 гады пры захаванні ў належных умовах.
