Набор для выяўлення нуклеінавых кіслот Escherichia coli O157:H7 (метад ПЦР-флуоресцентного зонда)
Апісанне камплекта:
Кат.№FP102
Ён выкарыстоўваецца для хуткага выяўлення і скрынінга кішачнай палачкі O157:H7 у харчовых прадуктах, кармах, вадзе і пробах навакольнага асяроддзя.
Апісанні
Ён выкарыстоўваецца для хуткага выяўлення і скрынінга кішачнай палачкі O157:H7 у прадуктах харчавання, кармах, вадзе і пробах навакольнага асяроддзя.
[Прынцып тэсціравання]Згодна з прынцыпам тэхналогіі флуоресцентной ПЦР, спецыяльныя праймеры і зонды Taqman распрацаваны для спецыфічнага гена кішачнай палачкі O157: H7 і выяўляюцца пры дапамозе флуоресцентной ПЦР-інструмента, каб рэалізаваць выяўленне кішачнай палачкі O157: H7 Якаснае выяўленне ДНК.
Змест камплекта
Заўвага: датчык канала ROX не ўваходзіць у камплект.
| Cкампаненты | Спецыфікацыя | Qуантнасць |
| Буфер А | трубка | 1 |
| Буфер Б | трубка | 1 |
| Станоўчы кантроль | трубка | 1 |
| Адмоўны кантроль | трубка | 1 |
Чаканае выкарыстанне
Ён выкарыстоўваецца для хуткае выяўленне і скрынінг кішачнай палачкі O157:H7 у пробах харчовых прадуктаў, кармоў, вады і навакольнага асяроддзя.
Умовы захоўвання і тэрмін прыдатнасці
Захоўваць пры -20 ℃ у цемры і пазбягаць паўторнага замарожвання і адтавання.
Тэрмін дзеяння - 12месяцаў, а дата вытворчасці паказваецца на знешняй упакоўцы.
Інструменты і расходныя матэрыялы
Флуарэсцэнтны прыбор для колькаснай ПЦР, піпетка і адпаведныя наканечнікі, віхравы шейкер, міні-цэнтрыфуга.
Выкарыстанне
1. Апрацоўка ўзораў
1.1 Тып пробы: Гэты набор падыходзіць для проб харчовых прадуктаў, кармоў, вады і іншых пробаў, якія падазраюцца ў заражэнні кішачнай палачкай O157:H7.Мясныя прадукты глыбокай апрацоўкі, напоі і іншыя рэчывы, якія змяшчаюць пігменты, неабходна прамыць, каб не паўплываць на збор флуарэсцэнтнага сігналу.
1.2 Апрацоўка проб: звярніцеся да "GB 4789.10-2016 Нацыянальны стандарт бяспекі харчовых прадуктаў па мікрабіялагічным даследаванні кішачнай палачкі O157: Тэст H7" для падрыхтоўкі проб, ўзбагачэння культуры і вылучэння кішачнай палачкі O157: H7.
- Nэкстракцыя нуклеінавай кіслаты
Вазьміце 20 мл раствора для ўзбагачэння ў цэнтрыфужную прабірку аб'ёмам 1,5 мл, дадайце 200 мкл мікробнага лізата (патрабуецца дадатковы набор), змяшайце на вортэксе на працягу 30 секунд, ненадоўга адцэнтрыфугуйце і адстаўце ў бок.
Заўвагі: вылучэнне нуклеінавай кіслаты з лізата павінна быць завершана на працягу 10 хвілін і не можа захоўвацца працяглы час.
3. Ампліфікацыя нуклеінавых кіслот
3.1 Уключыце флуоресцентный колькасны ПЦР-прыбор для выкарыстання.
Буфер A і буфер B з набору, старанна расплавіце іх і ненадоўга адцэнтрыфугуйце.Дадайце 18 мкл буфера A і 2 мкл буфера B у кожную рэакцыйную прабірку для ПЦР.Затым дадайце па 5 мл адмоўнага кантролю, экстрагаванай нуклеінавай кіслаты і станоўчага кантролю ў рэакцыйныя прабіркі для ПЦР, зачыніце прабіркі вечкамі і ненадоўга адцэнтрыфугуйце.
3.3 Перанясіце прабірку для рэакцыі ПЦР у люмінесцэнтны апарат ПЦР і выкарыстоўвайце наступныя працэдуры для правядзення эксперыментаў па ампліфікацыі: адбярыце 25 мл для рэакцыйнай сістэмы, збярыце сігналы флуарэсцэнцыі пры 60°C для кожнага цыклу і абярыце FAM для канала выяўлення.
| Крок | праграма | Колькасць цыклаў |
| 1 | 37 ℃ 5 хвілін | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 хвіліны | 1 |
| 3 | 95°C 15 с | 4 0 |
| 60 ℃ 30 с (збор флуарэсцэнцыі) |
Кіраўніцтва па аналізе праблем
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
РНК не можа быць выдзелена або выхад нуклеінавай кіслаты нізкі
Звычайна існуе мноства фактараў, якія ўплываюць на эфектыўнасць аднаўлення, напрыклад: утрыманне РНК у пробе, метад працы, аб'ём элюіравання і г.д.
Аналіз агульных прычын:
1. Ледзяная ванна або нізкатэмпературнае (4 ° C) цэнтрыфугаванне падчас працы.
Прапанова: Праца пры пакаёвай тэмпературы (15-25 °C), ніколі не ледзяная ванна і нізкатэмпературная цэнтрыфуга.
2. Няправільнае захоўванне ўзору або занадта доўгае захоўванне ўзору.
Прапанова: Захоўвайце ўзоры пры -80 °C або замарожвайце ў вадкім азоце і пазбягайце паўторнага замарожвання-адтавання;паспрабуйце выкарыстоўваць свежесобранные ўзоры для экстракцыі РНК.
3.Недастатковы лізіс пробы
Рэкамендацыя: Калі ласка, пераканайцеся, што ўзор і працоўны раствор (лінейны акрыламід) былі старанна перамешаны і інкубаваны на працягу 10 хвілін пры пакаёвай тэмпературы (15-25 ° C)
4. Элюент быў дададзены няправільна
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што ddH2O без РНКазы дададзены ў сярэдзіну мембраны ачышчальнай калонкі
5. Неадпаведны аб'ём бязводнага этанолу ў буферы viRW2
Прапанова: выконвайце інструкцыі, дадайце патрэбны аб'ём бязводнага этанолу ў буфер viRW2 і добра змяшайце іх перад выкарыстаннем набору.
6. Няправільнае выкарыстанне ўзору.
Прапанова: 200 мкл пробы на 500 мкл буфера viRL.Празмерны аб'ём пробы прывядзе да зніжэння хуткасці экстракцыі РНК.
7. Няправільны аб'ём элюіравання або няпоўнае элюіраванне.
Прапанова: аб'ём элюента ачышчальнай калонкі складае 30-50 мкл;калі эфект элюіравання не з'яўляецца здавальняючым, рэкамендуецца дадаць папярэдне нагрэты ddH без РНКазы2O і падоўжыць час размяшчэння пры пакаёвай тэмпературы, напрыклад, 5-10 хвілін
8. У ачышчальнай калоне ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання ў буферы viRW2.
Прапанова: калі этанол усё яшчэ застаецца пасля прамывання ў буферы viRW2 і цэнтрыфугавання ў пустой прабірцы на працягу 2 хвілін, ачышчальную калонку можна пакінуць пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін пасля цэнтрыфугавання ў пустой прабірцы для поўнага выдалення рэшткаў этанолу.
Дэградацыя вычышчаных малекул РНК
Якасць вычышчанай РНК залежыць ад такіх фактараў, як захоўванне ўзораў, заражэнне РНКазой і эксплуатацыя.
Аналіз агульных прычын:
1. Сабраныя ўзоры не былі своечасова захаваны.
Прапанова: калі ўзор не быў выкарыстаны своечасова пасля збору, неадкладна захоўвайце яго пры -80 ℃ або ў вадкім азоце.Для экстракцыі малекул РНК старайцеся, калі гэта магчыма, выкарыстоўваць свежесобранные ўзоры.
2. Сабраныя ўзоры неаднаразова замарожваліся і адтавалі.
Прапанова: пазбягайце паўторнага замарожвання і размарожвання (не больш за адзін раз) падчас збору і захоўвання проб, у адваротным выпадку выхад нуклеінавай кіслаты знізіцца.
3.РНКаза была ўведзена ў аперацыйнай або не надзяваліся аднаразовыя пальчаткі, маскі і г.д.
Прапанова: Эксперымент па экстракцыі малекул РНК лепш праводзіць у асобнай аперацыйнай РНК, а эксперыментальны стол перад эксперыментам прыбіраць.Апранайце аднаразовыя пальчаткі і маскі падчас эксперыменту, каб пазбегнуць дэградацыі РНК, выкліканай увядзеннем РНКазы.
4. Рэагент забруджваецца РНКазой падчас выкарыстання.
Прапанова: заменіце на новы набор для выдзялення віруснай РНК для адпаведных эксперыментаў.
5. Забруджванне цэнтрыфужных прабірак, наканечнікаў піпетак і г.д. РНКазай. Прапанова: пераканайцеся, што ўсе цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі піпетак і піпеткі не ўтрымліваюць РНКазы.
Вычышчаныя малекулы РНК паўплывалі на эксперыменты ў далейшым
Малекулы РНК, ачышчаныя ачышчальнай калонкай, будуць уплываць на далейшыя эксперыменты, калі будзе занадта шмат іёнаў солі або бялкоў, такіх як: зваротная транскрыпцыя, Норзерн-блот і г.д.
1.У элюированных малекулах РНК засталіся іёны солі.
Рэкамендацыя: пераканайцеся, што правільны аб'ём бязводнага этанолу быў дададзены ў буфер viRW2, і двойчы прамыйце ачышчальную калонку ў адпаведнасці з правільнай хуткасцю цэнтрыфугавання ў інструкцыі па эксплуатацыі；Калі яшчэ засталіся іёны солі, вы можаце дадаць буфер viRW2 у ачышчальную калонку і пакінуць яе пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін.Затым правядзіце цэнтрыфугаванне, каб у найбольшай ступені выдаліць забруджванне іёнамі солі
2.У элюированных малекулах РНК застаецца этанол
Прапанова: пераканаўшыся, што ачышчальныя калонкі былі прамыты буферам viRW2, правядзіце цэнтрыфугаванне пустой прабіркі ў адпаведнасці з цэнтрабежнай хуткасцю, указанай у інструкцыі па эксплуатацыі.Калі ўсё яшчэ застаецца этанол, яго можна пакінуць на 5 хвілін пры пакаёвай тэмпературы пасля цэнтрыфугавання ў пустой прабірцы, каб выдаліць рэшткі этанолу ў найбольшай ступені.
Інструкцыі па эксплуатацыі:
Кіраўніцтва па эксплуатацыі набору для выдзялення віруснай РНК
