Шырока выкарыстоўваецца фермент Taq гарачага старту.У параўнанні са звычайнай ДНК-палімеразай, фермент Taq з гарачым пачаткам можа эфектыўна пазбегнуць некаторай неспецыфічнай ампліфікацыі і ўтварэння дымераў праймераў, а таксама можа эфектыўна палепшыць узровень паспяховасці ампліфікацыі гена-мішэні.Асабліва ў галіне генетычнага тэсціравання, фермент Taq з гарачым стартам быў вызначаны ў якасці абавязковага стандарту ў прамысловасці, і звычайная ДНК-палімераза не павінна выкарыстоўвацца.Як відаць з вышэйсказанага, ферменты Taq з гарачым стартам шырока выкарыстоўваюцца.У цяперашні час на ўнутраным рынку існуе мноства марак ферментаў Taq з гарачым пачаткам, але ферментаў Taq з гарачым пачаткам высокай якасці не так шмат.Сутыкнуўшыся з вялікай колькасцю ферментных прадуктаў Taq з гарачым стартам, як нам выбраць?

1. Выберыце фермент Taq з гарачым пачаткам з высокай эфектыўнасцю ўзмацнення

Эфектыўнасць ПЦР-ампліфікацыі цесна звязана з прадукцыйнасцю фермента Taq.Пасля аптымізацыі добрай ферментнай рэакцыйнай сістэмы Taq эфектыўнасць ампліфікацыі перавышае 95%, а дыяпазон ампліфікацыі пачатковай колькасці шаблону шырокі.Здавальняючая ампліфікацыя можа быць атрымана, калі ўтрыманне мэтавага гена нізкае, і няпроста атруціцца, калі колькасць шаблону вялікая, а перыяд экспанентнай ампліфікацыі доўгі.Для фермента Taq з нізкай прадукцыйнасцю, нават калі рэакцыйная сістэма была аптымізавана шмат разоў, эфектыўнасць ампліфікацыі ўсё яшчэ менш за 90%, форма «S» крывой ампліфікацыі невідавочная, нахіл невялікі, а крывая плоская.Калі колькасць шаблону невялікая, яго нельга ўзмацніць, а калі колькасць шаблону вялікая, эфект узмацнення не ідэальны.Такім чынам, выбар ДНК-палімераз з высокай эфектыўнасцю ампліфікацыі мае вырашальнае значэнне для поспеху ПЦР і кПЦР.

2. Абярыце гарачы энзім Taq з моцнай магутнасцю фермента

Ферментатыўная магутнасць фермента Taq звязана з эфектыўнасцю ўзмацнення.Як правіла, чым мацнейшая ферментатыўная здольнасць фермента Taq з гарачым пачаткам, тым даўжэй перыяд экспанентнага росту ампліфікацыі ПЦР, тым больш тыповая «S-вобразная» крывая, тым вышэй значэнне сігналу флуарэсцэнцыі і тым больш прыдатны для мультыплекснага выяўлення ПЦР.Фірмовыя ДНК-палімеразы са слабой ферментатыўнай здольнасцю звычайна могуць падтрымліваць толькі 2-плексныя рэакцыі.Пры правядзенні 3-плексных рэакцый крывая ампліфікацыі нізкая, значэнне сігналу флуарэсцэнцыі нізкае, і тыповай крывой ампліфікацыі няма, таму вынікі цяжка ацаніць.

3. Выберыце фермент Taq з гарачым стартам і высокай адчувальнасцю

Наогул кажучы, ДНК-палімераза мае высокую эфектыўнасць ампліфікацыі і высокую адчувальнасць, але ёсць і супярэчнасці.Калі колькасць мэтавага гена ва ўзоры, які падлягае ампліфікацыі, нізкая, рэкамендуецца праверыць адчувальнасць да ампліфікацыі фермента Taq.Найбольш распаўсюджаным метадам выяўлення з'яўляецца правядзенне 10-ці 5-кратнага градыентнага развядзення фрагмента плазміды гена-мішэні, правядзенне ПЦР-дэтэкцыі пры меншым развядзенні і выбар фермента Taq з гарачым стартам з больш высокай адчувальнасцю выяўлення.

З вышэйсказанага відаць, што даследчыкі павінны выбіраць у адпаведнасці са сваімі эксперыментальнымі патрабаваннямі і ўмовамі фінансавання.Лепш за ўсё правесці эксперымент па ўзмацненні з градыентным развядзеннем, каб выявіць эфектыўнасць узмацнення і адчувальнасць фермента Taq з гарачым стартам.

Прыклад Foregene's Taq ДНК-палімераза:

ДНК-палімераза Foreasy HS Taq

Апісанне

ДНК-палімераза Foreasy HS Taq - гэта ДНК-палімераза, якая экспрэсуецца ў інжынерных бактэрыях Escherichia coli з дапамогай тэхналогіі рэкамбінацыі генаў.Фермент спалучаецца з унікальным рэакцыйным буферам, які робіць прадукт вельмі ўстойлівым і сумяшчальным, і можа непасрэдна выкарыстоўваць узор лізата (сістэма Foregene Lysis) у якасці шаблону для рэакцый выяўлення.

Ужыванне

Якасная ПЦР і колькасная ПЦР выяўленне ачышчаных і неачышчаных шаблонаў.

Кантроль якасці

1.Актыўнасці экзагеннай нуклеазы не выяўлена

2. Метад ПЦР для выяўлення рэшткавай геномнай ДНК без гаспадара

3. Ён можа эфектыўна ўзмацняць аднакопійныя гены ў геноме чалавека

4. Захоўваць пры пакаёвай тэмпературы на працягу тыдня, без відавочных змен актыўнасці

Падрабязная інфармацыя пра прадукт: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/