Стварэнне SOP System

Стварэнне SOP эксперыменту ПЦР для стандартызацыі паводзін персаналу эксперыменту.

Эксперыментатары строга прытрымліваюцца аперацыйных працэдур і зводзяць да мінімуму забруджванне ПЦР, якое можа быць выклікана чалавечым фактарам, або прадухіляюць узнікненне забруджвання падчас працы.Акрамя таго, эксперыментатар павінен валодаць адпаведнымі прафесійнымі ведамі і навыкамі, у тым ліку ўмець працаваць з адпаведным абсталяваннем, удакладняць увесь працоўны працэс, валодаць метадамі ачысткі ад забруджванняў і метадамі лабараторнага кантролю якасці, а таксама ўмець правільна інтэрпрэтаваць вынікі выпрабаванняў.

Будынак стандартнай ПЦР-лабараторыі

ПЦР-лабараторыя ў прынцыпе падзелена на чатыры зоны, а менавіта зону падрыхтоўкі рэагентаў, зону апрацоўкі пробаў, зону ампліфікацыі і зону аналізу прадуктаў ампліфікацыі.Першыя дзве вобласці з'яўляюцца абласцямі папярэдняга ўзмацнення, а апошнія дзве - абласцямі пасля ўзмацнення.Зона папярэдняй ампліфікацыі і зона пасля ампліфікацыі павінны быць строга падзеленыя.Эксперыментальныя матэрыялы, рэагенты, папера для запісаў, ручкі, ачышчальныя матэрыялы і г.д. могуць паступаць толькі з зоны папярэдняй ампліфікацыі ў зону пасля ампліфікацыі, гэта значыць з зоны падрыхтоўкі рэагентаў, зоны апрацоўкі ўзораў, зоны ампліфікацыі і зоны аналізу прадукту ампліфікацыі, і не павінны цячы ў адваротным кірунку.Паток паветра ў лабараторыі таксама павінен ісці ад зоны папярэдняга ўзмацнення да зоны пасля ўзмацнення, а не ў зваротным кірунку.

Скараціце эксперыментальныя этапы

Калі лабараторыя праводзіць толькі ПЦР-дэтэктыў і ідэнтыфікацыю, рэкамендуецца выкарыстоўваць флуоресцентную колькасную ПЦР замест звычайнай ПЦР.

Вынікі колькаснага выяўлення ПЦР па флуарэсцэнцыі можна сабраць і прааналізаваць з дапамогай флуоресцентных сігналаў, таму няма неабходнасці адкрываць вечка для электрафарэзу пасля рэакцыі, што дазваляе пазбегнуць забруджвання прадуктаў ПЦР, выкліканага ўцечкай прадуктаў рэакцыі з адукацыяй аэразоляў.Калі вы павялічыце колькасць адкрыццяў каўпачка на этапе загрузкі гелевага электрафарэзу, верагодна, адбудзецца аэразольнае забруджванне.Рэкамендуецца прасоўваць прымяненне колькаснай ПЦР і паступова замяняць якасную ПЦР.

Прыняць сістэму барацьбы з забруджваннем UNG

Для ПЦР-рэакцыі выкарыстоўваецца сістэма кантамінацыі прадукту UNG anti-PCR.

Сістэма выкарыстоўвае dUTP замест dTTP.Пасля рэакцыі ПЦР усе прадукты ПЦР (фрагменты ДНК) аб'ядноўваюцца з dUTP;у наступным раундзе рэакцыі ПЦР фермент UNG, дададзены ў сістэму, інкубуецца пры 37°C на працягу 5 хвілін перад ПЦР, якая можа быць спецыфічнай. Дэградуйце ўсе фрагменты ДНК, якія змяшчаюць dUTP, а затым правядзіце рэакцыю ПЦР.Гэта можа цалкам выдаліць аэразольнае забруджванне, выкліканае прадуктамі ПЦР.Эфект паказаны на малюнку ніжэй:

Заўвага: для прамой серыі ПЦР вы можаце выбраць прадукты серыі сістэмы супраць забруджвання прадуктамі ПЦР ад FJ Biotech

Прапануйце

Для лабараторый, якія праводзяць буйнамаштабнае генатыпаванне, настойліва рэкамендуецца выкарыстоўваць сістэму забруджвання прадукту UNG супраць ПЦР для тэставання рэагентаў у дадатак да будаўніцтва разумных лабараторый.

Напамін: выкарыстанне гэтай сістэмы не можа ліквідаваць заражэнне ПЦР-прадуктам, якое ўжо было выклікана.Такім чынам, сістэму UNG трэба выкарыстоўваць у пачатку адпаведнага тэсту, а сістэму UNG трэба заўсёды выкарыстоўваць для ампліфікацыі ПЦР, каб прадухіліць заражэнне прадуктаў ПЦР.Ілжывы станоўчы вынік.

Рэкамендуецца выкарыстоўваць сістэму Direct PCR-UNG кампаніі Forge Biotech пры правядзенні буйнамаштабных тэсціравання, такіх як: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Набор для прамой ПЦР насення раслін-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Набор для прамой ПЦР Zebra Fish Direct-UNG.

Гэтая серыя набораў ад Foregene можа не толькі выконваць ПЦР-дэтэкцыю хутка і ў вялікіх маштабах, але і эфектыўна прадухіляць і кантраляваць заражэнне прадуктам ПЦР.