Стварэнне SOP эксперыменту ПЦР для стандартызацыі паводзін персаналу эксперыменту.
Эксперыментатар строга прытрымліваецца аперацыйных працэдур і зводзіць да мінімуму забруджванне ПЦР, якое можа быць выклікана чалавечым фактарам, або прадухіляе ўзнікненне забруджвання.Акрамя таго, эксперыментатар павінен валодаць адпаведнымі прафесійнымі ведамі і навыкамі, у тым ліку ўмець працаваць з адпаведным абсталяваннем, удакладняць увесь працоўны працэс, валодаць метадамі ачысткі ад забруджванняў і метадамі лабараторнага кантролю якасці, а таксама ўмець правільна інтэрпрэтаваць вынікі выпрабаванняў.
Стварыце стандартную ПЦР-лабараторыю.
ПЦР-лабараторыя ў прынцыпе падзелена на чатыры зоны, а менавіта зону падрыхтоўкі рэагентаў, зону апрацоўкі пробаў, зону ампліфікацыі і зону аналізу прадуктаў ампліфікацыі.Першыя дзве вобласці з'яўляюцца абласцямі папярэдняга ўзмацнення, а апошнія дзве - абласцямі пасля ўзмацнення.Зона папярэдняй ампліфікацыі і зона пасля ампліфікацыі павінны быць строга падзеленыя.Эксперыментальныя матэрыялы, рэагенты, папера для запісаў, ручкі, якія чысцяць матэрыялы і г.д. могуць паступаць толькі з зоны папярэдняй ампліфікацыі ў зону пасля ампліфікацыі, гэта значыць з зоны падрыхтоўкі рэагентаў → зоны апрацоўкі ўзору → зоны ампліфікацыі → зоны аналізу прадукту ампліфікацыі, і не павінны цячы назад.Паток паветра ў лабараторыі таксама павінен цячы ад зоны папярэдняга ўзмацнення да зоны пасля ўзмацнення, а не цячы назад.Ідэальны дызайн лабараторыі ПЦР паказаны ніжэй:
Малюнак A: Ідэальны рэжым ПЦР-лабараторыі з адмоўным ціскам у буфернай пакоі
Малюнак B: Ідэальны лабараторны рэжым ПЦР з станоўчым ціскам у буфернай пакоі
Схемы ўстаноўкі лабараторыі ПЦР, прыведзеныя на малюнках А і малюнку Б, павінны быць больш ідэальным рэжымам наладкі, і лабараторыя з умовамі можа спасылацца на гэты рэжым для праектавання.Для звычайных лабараторый рэкамендуецца, каб зоны ПЦР-ампліфікацыі і ПЦР-ампліфікацыі маглі быць падзеленыя, а адкрыццё вечка павінна быць як мага меншым у зоне падрыхтоўкі пробы і ПЦР-ампліфікацыі.Памятайце: прадукты і эксперыментальныя матэрыялы ў зоне аналізу прадукцыі строга забаронена пераносіць у зону падрыхтоўкі проб і зону ПЦР-ампліфікацыі.
Калі лабараторыя праводзіць толькі ПЦР-дэтэктыў і ідэнтыфікацыю, рэкамендуецца выкарыстоўваць флуоресцентную колькасную ПЦР замест звычайнай ПЦР.
Вынікі колькаснага выяўлення ПЦР па флуарэсцэнцыі могуць быць сабраны і прааналізаваны з дапамогай сігналаў флуарэсцэнцыі, таму няма неабходнасці адкрываць вечка для правядзення электрафарэзу пасля рэакцыі, што дазваляе пазбегнуць заражэння прадуктам ПЦР, выкліканага ўцечкай прадуктаў рэакцыі з адукацыяй аэразоляў.Калі вы павялічыце колькасць адкрыццяў каўпачка на этапе загрузкі гелевага электрафарэзу, верагодна, адбудзецца аэразольнае забруджванне.Рэкамендуецца прасоўваць прымяненне колькаснай ПЦР і паступова замяняць якасную ПЦР.
Для ПЦР-рэакцыі выкарыстоўваецца сістэма кантамінацыі прадукту UNG anti-PCR.
Сістэма выкарыстоўвае dUTP замест dTTP.Пасля рэакцыі ПЦР усе прадукты ПЦР (фрагменты ДНК) аб'ядноўваюцца з dUTP;у наступным раундзе ПЦР-рэакцыі фермент UNG, дададзены ў сістэму, інкубуецца пры 37°C на працягу 5 хвілін перад ПЦР, што можа спецыфічна разбурыць усе фрагменты ДНК, якія змяшчаюць dUTP, а затым правесці ПЦР-рэакцыю.Гэта можа цалкам выдаліць аэразольнае забруджванне, выкліканае прадуктамі ПЦР.Эфект паказаны на малюнку ніжэй:
Заўвага: для прамой серыі ПЦР вы можаце выбраць прадукты серыі сістэмы анты-ПЦР ад забруджвання прадуктам ForegeneПрапануйце
Для лабараторый, якія праводзяць буйнамаштабнае генатыпаванне, настойліва рэкамендуецца выкарыстоўваць сістэму забруджвання прадукту UNG супраць ПЦР для тэставання рэагентаў у дадатак да будаўніцтва разумных лабараторый.
Напамін: выкарыстанне гэтай сістэмы не можа ліквідаваць заражэнне ПЦР-прадуктам, якое ўжо было выклікана.Такім чынам, сістэму UNG трэба выкарыстоўваць у пачатку адпаведнага тэсту, а сістэму UNG трэба выкарыстоўваць для ампліфікацыі ПЦР, каб прадухіліць заражэнне прадуктамі ПЦР.
Рэкамендуецца выкарыстоўваць сістэму Direct PCR-UNG кампаніі Foregene пры правядзенні буйнамаштабных даследаванняў, такіх як:
Набор для прамой ПЦР на лісце раслін-UNG；
Набор для прамой ПЦР насення раслін-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Набор для прамой ПЦР Zebra Fish Direct-UNG.
Гэтая серыя набораў ад Foregeneможа не толькі хутка і ў вялікіх маштабах праводзіць выяўленне ПЦР, але і эфектыўна прадухіляць і кантраляваць заражэнне прадуктам ПЦР.
Час публікацыі: 19 сакавіка 2021 г
