Асаблівасцю ПЦР-рэакцыі з'яўляецца яе вялікая здольнасць да ўзмацнення і надзвычай высокая адчувальнасць.Каб палепшыць прадукцыйнасць ПЦР і эфектыўнасць выяўлення, мы імкнемся палепшыць здольнасць ПЦР-ампліфікацыі і адчувальнасць выяўлення, але галаўны боль знаходзіцца ў працэсе эксперыменту.Часта здараюцца ілжывыя дадатныя вынікі, і вельмі невялікая колькасць перакрыжаванага забруджвання ўзору або забруджвання ПЦР прадуктам можа выклікаць ілжывыя дадатныя вынікі ў эксперыменце.
Пяць відаў заражэння прадукту ПЦР
Прычын ПЦР-заражэння шмат, якія ўмоўна можна падзяліць на наступныя катэгорыі:
Забруджванне ўзору ў асноўным выклікана забруджваннем кантэйнера для збору ўзору, або калі ўзор змяшчаецца, ён выцякае з кантэйнера з-за няшчыльнай герметызацыі, або ўзор прыліп да вонкавага боку кантэйнера, што выклікае перакрыжаванае заражэнне;Забруджванне прыводзіць да забруджвання паміж узорамі;некаторыя мікробныя ўзоры, асабліва вірусы, могуць распаўсюджвацца з аэразолямі або ўтвараць аэразолі, што прыводзіць да ўзаемнага заражэння.
Асноўная прычына ў тым, што падчас падрыхтоўкі рэагентаў для ПЦР пісталет для ўзору, кантэйнер, двайны дыстыляваная вада і іншыя растворы забруджваюцца шаблонам нуклеінавай кіслаты ПЦР.
У лабараторыях малекулярнай біялогіі і некаторых лабараторыях, якія выкарыстоўваюць кланаваныя плазміды ў якасці станоўчага кантролю, праблема заражэння кланаванымі плазмідамі таксама часта сустракаецца.Паколькі ўтрыманне плазміды для кланавання ў адзінцы аб'ёму даволі высокае, і ў працэсе ачысткі патрабуецца больш інструментаў і рэагентаў, і плазміда ў жывых клетках вельмі верагодна забруджана з-за моцнай здольнасці жывых клетак да росту і размнажэння.
Забруджванне ампліфікаваных прадуктаў з'яўляецца найбольш распаўсюджанай праблемай заражэння ў рэакцыях ПЦР.Паколькі колькасць копій прадукту ПЦР вялікая (звычайна 1013 копій/мл), што значна перавышае ліміт колькасці копій выяўлення ПЦР, вельмі невялікая колькасць забруджвання прадуктам ПЦР можа выклікаць ілжывыя спрацоўванні.
Аэразольнае забруджванне з'яўляецца найбольш верагоднай формай заражэння прадуктаў ПЦР, і яе таксама лягчэй за ўсё не заўважыць.Ён утвараецца ў выніку трэння паміж паверхняй вадкасці і паветрам.Як правіла, аэразольнае забруджванне можа ўтварыцца пры адкрыцці вечка, пры аспірацыі пробы або нават пры энергічных боўтаннях рэакцыйнай трубкі.Паводле разлікаў, часціца аэразоля можа ўтрымліваць 48 000 копій, таму выкліканае ёю забруджванне з'яўляецца праблемай, якая заслугоўвае асаблівай увагі.
У прыватнасці, выпрабавальныя лабараторыі часта выкарыстоўваюць адну і тую ж пару праймераў для праверкі пэўнага гена.З часам у лабараторных памяшканнях адбудзецца вялікая колькасць заражэння ПЦР-прадуктам.Як толькі такое забруджванне ўзнікае, яго цяжка ліквідаваць за кароткі час.
Для першых трох відаў забруджвання мы можам выкарыстоўваць эфектыўныя сродкі, каб пазбегнуць, але забруджванне, выкліканае прадуктамі ПЦР, цяжка прадухіліць, асабліва пры будаўніцтве нестандартных лабараторый ПЦР.У працэсе ПЦР, калі наканечнік піпеткі ўсмоктвае і выдзімае вадкасць, а вечка прабіркі ПЦР адкрываецца, утворыцца аэразоль.Малекулы ДНК, якія пераносяцца аэразолем (адзін аэразоль можа несці дзясяткі тысяч ДНК), цяжка ліквідаваць, таму што яны лунаюць у паветры.Як толькі будзе ўведзены наступны раунд эксперыментаў ПЦР, непазбежна адбудуцца ілжывыя спрацоўванні.
Як паказана на малюнку ніжэй, адмоўны кантроль таксама ўзмацніў адпаведную цікавую паласу:
Тут прадстаўлена першая частка гэтага пытання аб ПЦР-забруджванні і прафілактыцы.У наступным нумары вы знойдзеце другую частку «Прафілактыка заражэння прадуктаў ПЦР», так што сачыце за навінамі!
Час размяшчэння: 25 ліпеня 2017 г
