Аўтары: Ван Сяоянь, Чжао Эрю

Падраздзяленне: бальніца Цзяочжоу, бальніца Дунфан пры ўніверсітэце Тунцзі

У цяперашні час асноўным тыпам пробы для выяўлення нуклеінавых кіслот узбуджальнікаў дыхальных шляхоў з'яўляецца мазок з горла.Ёсць шмат відаў раствораў для кансервавання пробаў, якія звычайна выкарыстоўваюцца, і ўсе яны павінны быць у халадзільніку або замарожаны для транспарціроўкі і захоўвання;Цяжка кантраляваць увесь працэс нізкай тэмпературы ў працэсе збору і транспарціроўкі, а таксама цяжка забяспечыць кантроль якасці перад тэставаннем узораў^[1-2].

РНКаза (РНКаза) - гэта эндануклеаза, якая гідралізуе РНК, у асноўным разрываючы фосфадыэфірныя сувязі паміж нуклеатыдамі.Малекула РНКазы вельмі стабільная, у структуры прысутнічаюць дысульфідныя сувязі, і для яе актыўнасці не патрабуецца прысутнасць двухвалентных катыёнаў, таму РНКаза не дэнатуруецца лёгка, і яе лёгка рэнатураваць нават пасля высокай тэмпературы або выкарыстання дэнатуратаў.РНКазы падзяляюць на эндагенныя і экзагенныя.Эндагенныя РНКазы могуць вылучацца адначасова з разрывам клетак.Такім чынам, ліквідацыя ролі эндагенных РНКаз з'яўляецца вельмі важным этапам у працэсе экстракцыі РНК.Экзагенныя РНКазы шырока распаўсюджаныя.РНКазы існуюць у паветры, скуры чалавека, валасах і сліне, што з'яўляецца важнымі прычынамі лёгкай дэградацыі РНК^[3].

Запыт дадзеных

У тэхнічных патрабаваннях CANS-CL02-A009 «Прымяненне рэкамендацый па акрэдытацыі якасці і кампетэнтнасці медыцынскіх лабараторый у галіне малекулярнай дыягностыкі» прапануецца сфармуляваць адпаведныя стандарты якасці вады ў адпаведнасці з заяўкай;Аднаразовыя герметычныя кантэйнеры:

РНКаза/Класіфікацыя

(1) РНКаза А

Рыбануклеаза A (РНКаза A), атрыманая з падстраўнікавай залозы буйной рагатай жывёлы, з'яўляецца эндарыбануклеазай, якая можа спецыфічна атакаваць 3'-канец рэшткаў пірымідыну на РНК, разразаючы цытазін або урацыл, утвораны суседнімі нуклеатыдамі.Фосфадыэфірная сувязь, канчатковым прадуктам рэакцыі з'яўляецца 3'-пірымідзінавы нуклеатыд і алігануклеатыд з 3'-пірымідзінавым нуклеатыдам на канцы.

(2) РНКаза Т1

Рыбануклеаза Т1 (РНКаза Т1) паходзіць ад Aspergillus orjzae, яна спецыфічна дзейнічае на 3'-канцавы фасфат гуаніну, а месца расшчаплення знаходзіцца паміж 3'-фасфатам гуаніну і 5'-гідраксілам суседніх нуклеатыдаў.Канчатковым прадуктам рэакцыі з'яўляецца 3'гуанілавая кіслата і алігануклеатыдныя фрагменты з 3'гуанілавай кіслатой на канцы.

(3) РНКаза H

Рыбануклеаза Н (РНКаза Н) упершыню была выяўлена ў тканінах вілачкавай залозы цяля, а ген, які кадуе яе, быў кланаваны ў кішачную палачку.Ён можа спецыяльна дэградаваць ДНК: ланцугі РНК у гібрыдных дуплексах РНК, у выніку чаго ўтвараюцца алігануклеатыды і монануклеатыды з 3'-OH і 5'-монафасфатнымі канцамі, ён не можа дэградаваць адна- або двухцепочечную ДНК або РНК.

РНКаза

Функцыя і выкарыстанне

Рыбануклеаза можа каталізаваць дэградацыю рыбануклеінавай кіслаты (РНК) і можа быць сінтэзавана штучна.Лячэбная мазь выкарыстоўваецца вонкава для лячэння траўмаў і боляў у суставах.Паводле паведамленняў, рыбануклеаза можа змяняць метабалізм клетак гаспадара, інгібіраваць сінтэз віруса, інгібіраваць праліферацыю віруса грыпу in vitro і інгібіраваць адукацыю вакцыніі і віруса герпесу ў курыных эмбрыёнах.Клінічнае выкарыстанне рыбануклеазы штодня нутрацягліцавыя ін'екцыі 180 мг, карысныя для лячэння эпідэмічнага энцэфаліту, рыбануклеаза можа каталізаваць дэградацыю рыбануклеінавай кіслаты (РНК), і цяпер можа быць штучна сінтэзаваны.Лячэбная мазь выкарыстоўваецца вонкава для лячэння траўмаў і боляў у суставах.Паводле паведамленняў, рыбануклеаза можа змяняць метабалізм клетак гаспадара, інгібіраваць сінтэз віруса, інгібіраваць праліферацыю віруса грыпу in vitro і інгібіраваць адукацыю вакцыніі і віруса герпесу ў курыных эмбрыёнах.Клінічнае прымяненне рыбануклеазы штодня нутрацягліцава па 180 мг карысна для лячэння эпідэмічнага энцэфаліту.

РНКаза

Інгібітар Вызначэнне

Вызначэнне адзінкі інгібітара РНКазы: Колькасць фермента, неабходнага для інгібіравання 50% актыўнасці 5 нг РНКазы А, роўная адной адзінцы.

Як працуюць інгібітары РНКазы

Гуанідзін изотиоцианат:

Гуанідзін изотиоцианат - гэта арганічнае злучэнне з малекулярнай формулай C2H6N4S.У асноўным выкарыстоўваецца ў біялагічнай медыцыне, хімічных рэагентах і г. д. Гуанідынізатыяцыянат з'яўляецца лізіруючым бялок агентам, які часта выкарыстоўваецца ў якасці асноўнага кампанента лізіснага раствора ў малекулярных дыягнастычных рэагентах.Ён можа лізаваць тканіны, разбураць клетачную структуру і аддзяляць нуклеінавую кіслату ад нуклеапратэіна, а таксама мае моцную дэнатурацыю да РНКазы.Гэта найбольш эфектыўны інгібітар РНКазы ў цяперашні час.

TRIzol - гэта новы рэагент для экстракцыі агульнай РНК, які можа непасрэдна здабываць агульную РНК з клетак або тканін.Ён змяшчае такія рэчывы, як фенол і гуанідзін изотиоцианат, якія могуць хутка разбураць клеткі і інгібіраваць нуклеазы, якія выдзяляюцца клеткамі.

(Аднак гуанідзін изотиоцианат небяспечны для здароўя лабараторных даследчыкаў.)

Рнасін:

Кіслотны глікапратэін, здабыты з печані пацукі або бластадэрмы чалавека.Рназін - гэта неканкурэнтны інгібітар РНКазы, які можа звязвацца з рознымі РНКазамі, каб інактываваць іх.

(Больш падрабязна: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hвысокая тэмпература:

Высокая тэмпература таксама з'яўляецца распаўсюджаным сродкам дэнатурацыі бялку.

Дыэтылпіракарбанат (DEPC):

DEPC з'яўляецца моцным, але няпоўным інгібітарам РНКазы, які можа інгібіраваць актыўнасць РНКазы шляхам злучэння з імідазолавым кольцам амінакіслоты актыўнай групы РНКазы для дэнатурацыі бялкоў.

Ванадил рибонуклеозидный комплекс:

Комплекс, утвораны іёнамі аксіду ванадыя і нуклеазідамі, які звязваецца з РНКазой у выглядзе пераходных рэчываў, здольных амаль цалкам інгібіраваць актыўнасць РНКазы

іншае:

Пэўны інгібіруе дзеянне на РНКазу аказваюць таксама SDS, мачавіна, кизельгур і інш.

Агляды спецыялістаў

Лі Юйцзе галоўны тэхнік

Дырэктар лабараторнага аддзела бальніцы Цзяочжоу бальніцы Дунфан пры ўніверсітэце Тунцзі

Каб прадухіліць біядэградацыю экзагеннай РНКазы, маскі, пальчаткі і галаўныя ўборы трэба насіць і часта мяняць падчас працэсу экстракцыі РНК.Усе шкляныя вырабы неабходна выпякаць у сушыльнай шафе пры тэмпературы 200°C больш за 2 гадзіны.Матэрыялы, якія выкарыстоўваюцца для выпечкі, такія як пластык, неабходна апрацаваць вадой DEPC, а затым прамыць дыстыляванай вадой.Рэагенты або прылады, якія выкарыстоўваюцца для экстракцыі, захавання і ідэнтыфікацыі РНК, павінны быць прызначаны для РНК, і павінна быць створана незалежная зона працы з РНК.

спасылкі:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Бактэрыі і вірусы ў насаглотцы непасрэдна перад пачаткам вострых інфекцый ніжніх дыхальных шляхоў у дзяцей карэннага насельніцтва Аўстраліі [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018, 37 (9): 1785-1794.

[2] Аддзяленне кантролю бальнічных інфекцый Кітайскай асацыяцыі прафілактычнай медыцыны.Кіраўніцтва па зборы і праверцы клінічных мікробных узораў [J].Кітайскі часопіс шпітальнай інфекцыі, 2018 (20): 3192-3200.

[3] «Клінічны тэст Дзесяць тысяч Чаму Малекулярная біялогія Тэст Том»