Уводзіны:

РНК, навуковая назва рыбануклеінавая кіслата, яе абрэвіятура паходзіць ад RiboNucleic Acid, - гэта тып нуклеінавай кіслаты, які ўтвараецца шляхам злучэння па меншай меры дзесяткаў рыбануклеатыдаў праз фосфадыэфірныя сувязі.

Перадумовай вывучэння РНК з'яўляецца вылучэнне чыстай ад забруджвання агульнай РНК, і асноўны прынцып вылучэння РНК можна прыкладна абагульніць наступным чынам:

1. Спачатку разбудзьце клеткі

2. Затым выдаліце ​​макрамалекулярныя прымешкі (вавёркі, ліпіды, ДНК і інш.)

3. Нарэшце, РНК асаджваецца пры выдаленні соляў і арганічных растваральнікаў і далейшай ачыстцы РНК

Мінулае і сучаснасць метаду здабычы

Першае пакаленне метаду экстракцыі РНК - гэта метад прэцыпітацыі TRIzol (выкарыстоўваныя рэагенты ўключаюць гуанідынізатыяцыянат, фенол, хлараформ і г.д.), вынайдзены дзядулем па імені Пётр Хомчынскі і бабуляй Нікалетай Сакі, таму што гэта вынаходніцтва дазваляе хутка і лёгка здабываць РНК, з тых часоў пачаўся ўсплёск даследаванняў РНК.

Пазней дзядуля прадаў гэты патэнт Invitrogen, і Invitrogen прасунуў гэты метад ва ўсім свеце і стаў шырока выкарыстоўваным метадам.

Пазней Invitrogen быў набыты Thermo!

Рэпрэзентатыўны прадукт: рэагент TRIzol ад Invitrogen

Аднак метад асаджэння TRIzol патрабуе шматразовага асаджэння і экстракцыі РНК, а выкарыстоўваюцца рэагенты таксічныя і працуюць доўга.

Такім чынам, з'явіўся метад ачысткі ферментамі ў калонцы другога пакалення з выкарыстаннем мембраны з силикагеля ў якасці спецыяльнага матэрыялу для адсорбцыі нуклеінавых кіслот для максімальнага аднаўлення РНК ва ўзоры пры адначасовым выдаленні іншых прымешак.

Метад другога пакалення спрашчае аперацыю на аснове стабільнай працы, зніжае фактар ​​рызыкі і павышае эфектыўнасць экстракцыі РНК.

Рэпрэзентатыўныя прадукты: QIAGEN RNeasy і большасць айчынных прадуктаў

Аднак метады як першага, так і другога пакалення патрабуюць выкарыстання ДНКазы для выдалення забруджвання ДНК, што дастаўляе некаторыя нязручнасці ў наступных эксперыментах.Рэшткавая ДНКаза знізіць эфектыўнасць зваротнай транскрыпцыі і паменшыць сінтэз кДНК першага ланцуга, што паўплывае на дакладнасць вынікаў.

Такім чынам, метад экстракцыі трэцяга пакалення аптымізаваны на аснове другога пакалення.Эксперымент не патрабуе дадання ферментаў, і РНК можна лёгка атрымаць толькі з двух слупкоў.

Калонка 1: Калонка ачысткі ДНК для ачысткі ДНК

Калонка 2: Калонка толькі для РНК спецыяльна адсарбуе і аднаўляе РНК

Такая простая аперацыя не толькі эканоміць час, але і палягчае правядзенне эксперыментаў!

Рэпрэзентатыўныя прадукты: QIAGEN RNeasy Plus іForegeneПрадукты серыі ачысткі РНК

（RNeasy Plus）

（Foregene'sНабор для вылучэння агульнай РНК раслін）

Скажу вам ціха!Набор РНК Foregene таксама ўяўляе сабой вельмі просты ў выкарыстанні RNase Eraser, які можа цалкам выдаліць 400 мкг РНКазы на цвёрдай паверхні за 1 хвіліну, не дадаючы ў арганізм чалавека ніякіх таксічных рэчываў!

Мал1: Параўнальная табліца аператыўнага працэсу

Прадукты Foregene могуць завяршыць экстракцыю РНК усяго за дзве песні, не прымушайце іншых зайздросціць ходу вашага эксперыменту!

Мал2:Eвынікі эксперыментаў параўнальная табліца

Першае пакаленне (1: TRIzol)

Другое пакаленне (2: RNeasy ад QIAGEN)

Трэцяе пакаленне (3: RNeasy plus ад QIAGEN, 4: Foregene)

Мал3: графік qPCR (графік крывой ампліфікацыі)

Першае пакаленне (зялёны азначае TRIzol -, чырвоны азначае TRIzol +)

Другое пакаленне (блакітны азначае QIAGEN RNeasy-, чырвоны азначае QIAGEN RNeasy +)

Трэцяе пакаленне (сіні азначае QIAGEN RNeasy plus, зялёны азначае Foregene)

(Заўвага: графік qPCR «-» паказвае, што ДНКаза не была дададзена і забруджванне ДНК не было выдалена. Такім чынам, КТ вышэй і вынік недакладны; «+» паказвае, што ДНКаза была дададзена і забруджванне ДНК выдалена, вынік дакладны)

Кожнае тэхнічнае абнаўленне азначае, што праца эксперымента развіваецца ў больш простым і зручным для карыстальніка кірунку.

Foregene імкнецца дапамагчы большай колькасці навуковых даследчыкаў зэканоміць час і выдаткі на эксперыменты, атрымаць высакаякасныя эксперыментальныя вынікі і сумесна стварыць больш каштоўныя дасягненні навуковых даследаванняў.