Метады ПЦР і аэразольнае забруджванне нуклеінавых кіслот у лабараторыях па аналізе нуклеінавых кіслот - як два бакі медаля.Мы можам толькі выбраць, мець гэта ці не, але мы не можам выбраць, хочам мы гэтага ці марнуем.

1. Скрынінг сродкі для выдалення ДНК

Каб дасягнуць прасторавага выдалення аэразольнага забруджвання нуклеінавых кіслот, спачатку неабходна адсеяць сродкі для выдалення ДНК, якія могуць выдаляць нуклеінавыя кіслоты ў вадкім стане.Таму што не так шмат сродкаў для выдалення ДНК, якія сапраўды працуюць.Каб даведацца пра эксперыментальны метад, звярніцеся да: сродак для выдалення ДНК не можа быць "сакрэтным кутком" лабараторыі!

У гэтым эксперыменце 100 копій/мкл (CT прыкладна 31) плазміды ASFV і сродкі для выдалення ДНК, колькасна вызначанага з дапамогай лічбавай ПЦР, змешвалі ў роўных аб'ёмах, а затым рэагавалі пры пакаёвай тэмпературы на працягу 10 хвілін, 20 хвілін і 30 хвілін адпаведна.Пасля экстракцыі нуклеінавых кіслот была праведзена ампліфікацыя qPCR.Параўноўвалі станоўчы кантроль, змешаны з плазмідай і вадой.Паколькі эксперымент не быў завершаны адначасова, паміж вынікамі можа быць пэўнае адхіленне, але гэта не ўплывае на вынік эксперыменту.Да гэтага часу я ацаніў 10 камерцыйных прадуктаў для выдалення ДНК.Толькі прадукты № 1, № 6 і № 8 могуць эфектыўна расшчапляць плазмидную ДНК у вадкім стане.Іншыя прадукты практычна не дзейнічаюць.

Табліца 1. Эфект выдалення нуклеінавых кіслот камерцыйна даступным сродкам для выдалення ДНК

2. Эксперымент з эфектам выдалення ДНК звычайна выкарыстоўваюцца дэзінфікуючых сродкаў

1. Скрынінг часта выкарыстоўваюцца сродкаў дэзінфекцыі

Ёсць шмат тыпаў дэзінфікуючых сродкаў, якія звычайна выкарыстоўваюцца ў лабараторыях: альдэгіды, фенолы, спірты, солі чацвярцічнага амонія, перакісы, прэпараты хлору, а таксама кіслоты і падставы.Дэзінфекцыйныя эфекты гэтых сродкаў дэзінфекцыі на мікраарганізмы былі цалкам правераны эксперыментамі, але няма дастатковых эксперыментальных дадзеных аб эфекце дэградацыі нуклеінавых кіслот.Лабараторыям па тэсціраванню нуклеінавых кіслот патрэбны дэзінфікуе сродак, якое не толькі аказвае добры дэзінфекцыйны эфект на мікраарганізмы, але і можа разбураць ДНК.Вынікі выпрабаванняў паказалі, што патрабаванням адпавядаюць толькі два прэпараты хлору 84 дэзінфекцыі і трыхларызацыянуравай кіслаты і 1 М салянай кіслаты.Паколькі 1 М саляная кіслата вельмі агрэсіўная, рэкамендуецца выкарыстоўваць прэпараты хлору для ўтылізацыі адходаў у лабараторыях па аналізе нуклеінавых кіслот.Аднак прэпараты хлору раз'ядаюць металы і не могуць выкарыстоўвацца для дэзінфекцыі інструментаў і абсталявання.

Табліца 2 Эфекты выдалення ДНК розных тыпаў дэзінфікуючых сродкаў

2. Мінімальна эфектыўная канцэнтрацыя прэпаратаў хлору

Дэзінфікуючыя сродкі на аснове хлору валодаюць моцным эфектам дэградацыі ДНК, але з-за карозійнай і раздражняльнай здольнасці да металаў іх можна выкарыстоўваць для мыцця падлогі, неметалічных стальніц, наканечнікаў для замочвання, цэнтрыфужных прабірак і іншых тэставых прадметаў.

У адпаведнасці з «Новымі тэхнічнымі рэкамендацыямі па дэзінфекцыі пры эпідэміі ішэмічнай пнеўманіі»: забруджвальныя рэчывы (кроў пацыентаў, вылучэнні і ванітавыя масы), даступны хлор, 5 г/л-10 г/л хлорзмяшчальны дэзінфікуе сродак;на падлозе, сценах і паверхнях прадметаў выкарыстоўвайце даступны хлорны дэзінфікуючы сродак 1 г/л: адзенне, пасцельная бялізна і іншы тэкстыль спачатку замочваюць у хлорным дэзінфікуючым сродку з 0,5 г/л даступнага хлору на 30 хвілін, а потым чысцяць, як звычайна.

Табліца 3 Эфект выдалення ДНК розных канцэнтрацый дэзінфікуе сродкі з хлорам

Вынікі выпрабаванняў паказваюць, што: калі эфектыўная канцэнтрацыя хлору перавышае або роўная 1,2 г/л, хлорзмяшчальны дэзінфікуе сродак можа цалкам пагаршаць 100 копій/мкл плазміды пры выкарыстанні на працягу 5 хвілін.Пры ўздзеянні на працягу 10 хвілін дэзінфікуе сродак 84 з эфектыўнай канцэнтрацыяй хлору, большай або роўнай 0,6 г/л, можа цалкам разбурыць 100 копій/мкл плазмід.

3. Эксперымент па выдаленні паветра, забруджанага аэразолем нуклеінавых кіслот

Як ачысціць паветра, забруджанае аэразолямі нуклеінавых кіслот?Большасць думак - стварыць забруджанае аэразолем асяроддзе, а затым ачысціць яго, або ачысціць нуклеінавыя кіслоты пасля забруджвання.Для мяне бессэнсоўны эксперымент, які немагчыма паўтарыць і вынікі эксперыменту не паддаюцца колькаснаму аналізу, таму я запазычыў некаторыя метады дэзінфекцыйнага абеззаражання паветра.Глядзіце "GB27948-2020 Агульныя патрабаванні да сродкаў дэзінфекцыі паветра" і "Тэхнічныя характарыстыкі дэзінфекцыі"

1. Кантрольныя матэрыялы

1.1 Сродак для выдалення ДНК: у гэтым эксперыменце былі выбраны два камерцыйна даступныя сродкі для выдалення ДНК 6 і 8 у табліцы 1.

1.2 Тэставая плазміда: Улічваючы, што значэнне CT для большасці лабараторных забруджванняў будзе вышэй за 30, канцэнтрацыя плазміды гена ASFV, якая выкарыстоўваецца ў гэты раз, складае каля 100 копій/мкл, а флуоресцентная колькасная ПЦР-КТ складае каля 31,07.Дадайце плазміду на ватовы тампон для флокіроўкі і высушыце на паветры.

1.3 Тэставы прыбор: дэзінфекцыйны прыбор Bilingkehan KVBOX, які ласкава падтрымліваецца Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., мае выдатныя характарыстыкі дэзінфекцыі паветра з дапамогай дэзінфікуючага сродкі перакісу вадароду і можа эфектыўна знішчаць спрэчкі і іншыя мікраарганізмы.

1.4 Тэставая прастора: закрытае трансфернае акно каля 0,1 куб.

2. Метад выпрабаванняў

Колькасць дэзінфікуе сродкі, усталяваная на дэзінфекцыйнай машыне, складае 10 мл, а канцэнтрацыя - 100 мл/м3, што значна вышэй, чым «Агульныя патрабаванні GB27948-2020 да сродкаў для дэзінфекцыі паветра»: пры выкарыстанні аэразольнага распылення колькасць дэзінфікуе сродкі павінна быць ≤10 мл/м3