Нядаўна я адкрыў для сябе нешта дзіўнае!Многія прасунутыя спецыялісты па эксперыментах вакол яго нават не ведаюць некаторых элементарных эксперыментальных ведаў.

Напрыклад, ці можаце вы адказаць на наступныя пытанні?

Ці ёсць розніца паміж OD260 і A260?Што азначае кожны?
OD - гэта абрэвіятура ад аптычнай шчыльнасці (аптычнай шчыльнасці), A - гэта абрэвіятура ад паглынальнай здольнасці (паглынальнай здольнасці), абодва паняцці насамрэч супадаюць, «аптычная шчыльнасць» - гэта «паглынальная здольнасць», але «аптычная шчыльнасць» адпавядае большасці нацыянальных стандартаў і больш стандартызавана.

Звычайна мы вымяраем значэнне OD пры 260 нм, каб вылічыць канцэнтрацыю нуклеінавых кіслот, так што ўяўляе 1 OD?
Нуклеінавая кіслата мае максімальны пік паглынання на даўжыні хвалі 260 нм, які змяшчае як ДНК, так і РНК, а таксама фрагментаваныя фрагменты нуклеінавых кіслот (гэта ключавы момант).
Значэнне OD, вымеранае на даўжыні хвалі 260 нм, было запісана як OD260.Калі ўзор чысты, значэнне OD260 можа вылічыць канцэнтрацыю ўзору нуклеінавай кіслаты.
1 OD260=50 мкг/мл дцДНК (двухцепочечная ДНК)
=37 мкг/мл оцДНК (адналанцуговая ДНК)
=40 мкг/мл РНК
=30 мкг/мл dNTP (алігануклеатыды)
Ці ёсць сувязь і розніца паміж RT-PCR, Realtime-PCR і QPCR?
RT-PCR - гэта скарачэнне ад ПЦР са зваротнай транскрыпцыяй
ПЦР у рэальным часе=кПЦР, скарачэнне ад Quantitative Real Time PCR
Хаця ПЦР у рэальным часе (флуоресцентная колькасная ПЦР у рэальным часе) і ПЦР са зваротнай транскрыпцыяй (ПЦР са зваротнай транскрыпцыяй) абодва, здаецца, абазначаюцца абрэвіятурай RT-PCR.Але міжнародная канвенцыя такая: RT-PCR канкрэтна адносіцца да ПЦР са зваротнай транскрыпцыяй.

Якія часта выкарыстоўваюцца nt, bp і kb для апісання даўжыні ДНК/РНК у біялогіі?
nt = нуклеатыд
bp = пара асноў пара асноў
kb = кілабаза

Вядома, вы б сказалі, што многія людзі не клапоцяцца пра гэтыя дробныя дэталі!Усе так робяць, і ніхто не спытае, што гэта такое.Вы ведаеце, што гэта непатрэбна, так?

Не, не, не, гэта вельмі неабходна ведаць!з-за чаго?
Таму што вы хочаце размясціць артыкул!брат!Незалежна ад таго, жадаеце вы атрымаць дыплом або шукаеце навуковых даследаванняў, вы павінны разлічваць на артыкулы!

Экстракцыя нуклеінавых кіслот павінна быць самым простым і асноўным эксперыментам.Якасць экстракцыі нуклеінавых кіслот напрамую вызначае вынікі наступных эксперыментаў.

Нягледзячы на ​​​​тое, што я казаў гэта шмат разоў, ёсць яшчэ шмат сяброў, якім усё роўна.На гэты раз я вырашыў выйсці з артыкула!

Мінімальная інфармацыя для публікацыі колькасных эксперыментаў ПЦР у рэальным часе, якія называюцца MIQE, гэта набор інструкцый па колькасных эксперыментах па флуарэсцэнцыі, запушчаны на міжнародным узроўні, які прапануе мінімальныя стандарты для эксперыментальнай інфармацыі, неабходнай для ацэнкі эксперыментаў па колькаснай ПЦР па флуарэсцэнцыі і публікацыі артыкулаў.З дапамогай эксперыментальных умоў і метадаў аналізу, прадстаўленых эксперыментатарам, рэцэнзенты могуць лепш ацаніць абгрунтаванасць эксперыментальнай схемы даследчыка.

Відаць, што ў раздзеле экстракцыі нуклеінавых кіслот былі прапанаваны наступныя элементы выяўлення,

«E» паказвае інфармацыю, якая павінна быць прадастаўлена, а «D» паказвае інфармацыю, якая павінна быць прадастаўлена ў выпадку неабходнасці.

Форма вельмі складаная, насамрэч я хачу сказаць, што кожнаму трэба з гэтага пачынаць

чысціня (D), выхад (D), цэласнасць (E) і кансістэнцыя (E) для ацэнкі нуклеінавых кіслот у гэтых чатырох аспектах.

Згодна з эксперыментальнымі звычкамі, спачатку пагаворым аб метадах ацэнкі чысціні і канцэнтрацыі.

Вымярэнне OD - любімы і самы просты метад выяўлення для эксперыментатараў.Што тычыцца прынцыпу, я не буду ўдавацца ў падрабязнасці.Многія лабараторыі цяпер выкарыстоўваюць ультрамікраспектрафатометры для непасрэднага колькаснага аналізу ўзораў нуклеінавых кіслот.Адлюстроўваючы значэнне паглынання, праграма непасрэдна дае значэнне канцэнтрацыі (нуклеінавай кіслаты, бялку і флуоресцентного фарбавальніка) і адпаведныя суадносіны.Што тычыцца аналізу значэння OD, захавайце гэты малюнак, і ўсё будзе добра.

Спіс рашэнняў універсальнага значэння OD

Тым не менш, ёсць некалькі агаворак, якія трэба вынесці асобна для вас.

(У рэшце рэшт, я ведаю, што вы павінны быць тымі, хто збірае грошы і чакае, пакуль яны вам спатрэбяцца!)

Заўвага 1 Абсталяванне

На значэнне OD будзе ўплываць рознае абсталяванне.Пакуль OD260 знаходзіцца ў пэўным дыяпазоне, значэнні OD230 і OD280 маюць значэнне.Напрыклад, дыяпазон паглынання звычайнага Eppendorf D30 пры 260 нм складае 0~3 A, а NanoDrop One ад Thermo - 260 нм.Дыяпазон паглынання 0,5~62,5А.

Заўвага 2Рэагент для развядзення

На значэнне OD можа паўплываць развядзенне розных рэагентаў.Напрыклад, паказанні OD260/280 вычышчанай РНК у pH7,5 10 мм Трысбуфер паміж 1,9-2,1, у той час як унейтральны водны растворстаўленне будзе ніжэй, магчыма, усяго 1,8-2,0, але гэта не значыць, што якасць РНК змяняецца Розніца.

Заўвага 3Рэшткавыя рэчывы

Існаванне рэшткавых рэчываў будзе ўплываць на дакладнасць вымярэння канцэнтрацыі нуклеінавых кіслот, таму неабходна, наколькі гэта магчыма, пазбягаць рэшткаў бялкоў, фенолаў, поліцукрыдаў і поліфенолаў у пробах нуклеінавых кіслот.

Аднак на самай справе экстракцыя арганічнымі рэагентамі - стары метад.У камерцыйных наборах эфект экстракцыі можа быць дасягнуты з дапамогай адсарбцыйнай калоны на аснове дыяксіду крэмнія ў спалучэнні з цэнтрыфугаваннем, пазбягаючы таксічных і шкодных арганічных рэагентаў, якія цяжка выдаліць, і г. д. Праблема, такая якНабор для экстракцыі нуклеінавых кіслот Foregene не выкарыстоўвае ДНКазу/РНКазу і таксічныя арганічныя рэагенты на працягу ўсёй аперацыі, хутка і бяспечна, іэфект ёсцьдобры(выпадкова сказаў, што гэта быў лысы, але я ведаю, што вы хочаце ведаць).

Прыклад 1: Выхад і чысціня экстракцыі геномнай ДНК

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) апрацоўвае ўзоры глебы з розных крыніц, і колькасць і чысціня атрыманай геномнай ДНК паказаны ў наступнай табліцы:
Прыклад 2: Выхад і чысціня экстракцыі тканкавай РНК

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) апрацаваў розныя ўзоры тканін, і колькасць і чысціня атрыманай РНК паказаны ў табліцы ніжэй (для мышынай тканіны):
Аднак не думайце, што вы скончылі са значэннем OD.Ці ёсць у вас што-небудзь паклапаціцца аб ключавых момантах, якія я намаляваў для вас наперадзе?

Заўвага

Фрагментаваныя малекулы нуклеінавых кіслот таксама будуць разлічвацца ў абсорбцыі.Калі выказаць здагадку, што ў вас ёсць рэшткі геномнай ДНК у РНК, ваша значэнне OD будзе выглядаць вельмі высокім, але фактычную канцэнтрацыю РНК вызначыць немагчыма.Ці з'яўляецца ваша РНК. Незразумела, ці адбываецца дэградацыя, таму нам усё яшчэ патрэбны комплексны метад ацэнкі, каб даць больш дакладнае меркаванне, гэта значыць ацэнка цэласнасці нуклеінавых кіслот, згаданая ў MIQE.