W:Брат, зваротная транскрыпцыя завершана, і, нарэшце, апошні крок – флуоресцентная колькасная ПЦР!Гэй, брат, што такое колькасная ПЦР у рэальным часе?
M:PCR вы заўсёды ведаеце, так?
W: Вы ведаеце, ПЦР - гэта палімеразная ланцуговая рэакцыя, і гэта тэхналогія, якая павялічвае ДНК!
М: Гэта амаль… Гэта тэхнічны метад для ўзмацнення паслядоўнасці-мішэні больш чым у мільён разоў з дапамогай спецыяльных праймераў, але гэта паказвае толькі наяўнасць або адсутнасць паслядоўнасці-мішэні і не можа вызначыць колькасць пачатковага шаблону.Флуарэсцэнтная колькасная ПЦР - гэта тэхнічны метад, распрацаваны для вырашэння гэтай праблемы.ПЦР у рэальным часе і колькасная ПЦР (кПЦР) звычайна адносяцца да яго.
W: Адрозненне ад звычайнай ПЦР заключаецца ў колькасным вызначэнні флуарэсцэнцыі?
М: Так, гэта значыць, на стадыі падаўжэння кожнага цыкла ПЦР выяўляецца інтэнсіўнасць сігналу флуарэсцэнцыі, і пачатковая колькасць шаблону можа быць разлічана ў адпаведнасці са змяненнем інтэнсіўнасці сігналу.
W: Гэта здаецца такім складаным!Ці павінен я разлічыць гэта самастойна?
М: Гэта патрабуе, каб вы вучыліся павольна, лепш за ўсё разумець прынцып.Цяпер вы можаце спачатку засяродзіцца на значэнні CT, якое з'яўляецца адносна інтуітыўна зразумелым эксперыментальным даным, і яго памер адпавядае памеру пачатковай сумы шаблону.Ёсць таксама такія графікі, як крывыя ўзмацнення і плаўлення.За імі застаецца апошняе слова аб тым, паспяховы ваш эксперымент ці не.
У: О, брат.Тады я збіраюся правесці эксперымент КПЦР!
M: Звяртайце асаблівую ўвагу на тое, каб не дадаваць шаблоны ў вобласць рэагентаў, інакш ваша нявыкарыстаная сумесь будзе лёгка забруджаная!
У: Зразумеў!

ПЦР у рэальным часе Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Больш высокая эфектыўнасць, большая канкрэтнасць
Высокая адчувальнасць, добрая сумяшчальнасць