Наступны аналіз магчымых праблем уБукальнытампон/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Засмечана ачышчальная калона

У гэтым наборы падчас аперацыі экстракцыі геномнай ДНК ачышчальная калонка непасрэдна адсарбуецца на сумесі ферментатыўнага лізісу ўзору без этапу цэнтрыфугавання, і ачышчальная калонка можа быць заблакаваная з-за няпоўнай ферментацыі і высокай глейкасці ўзору.

Наступныя магчымыя прычыны:

1. Няпоўнае ферментатыўнае расшчапленне узораў тканін.

Рэкамендацыя: час апрацоўкі ўзору Foregene Protease можа быць адпаведным чынам падоўжаны або супернатант можна ўзяць пасля цэнтрыфугавання пры 12000 абаротаў у хвіліну (~13400× ж) на працягу 5 мін.

2. Празмернае выкарыстанне узораў тканін або вялікіх тканін.

Рэкамендацыя: лепш не перавышаць 1Букальны мазок у пробу;калі ўзор занадта вялікі, адпаведна павялічце дазоўку буфера ST1, Foregene Protease, буфера ST2.

3. Глейкасць узору занадта высокая.

Рэкамендацыя: перад экстракцыяй геномнай ДНК пробы можна адпаведным чынам разбавіць 10 мМ трыс-HCl.

4. Фрагменты карты крыві былі высмактаныя.

Рэкамендацыя: пераходны час цэнтрыфугавання этапу 6 геномнай экстракцыі плямы крыві (FTA Card) можа быць адпаведным чынам падоўжаны.

Нізкі ўраджай або адсутнасць ДНК

Часта існуе мноства фактараў, якія ўплываюць на выхад геномнай ДНК, у тым ліку паходжанне ўзору, умовы захоўвання ўзору, падрыхтоўка ўзору, маніпуляцыі і г.д.

Геномную ДНК нельга атрымаць падчас экстракцыі

Магчымыя прычыны:

1. Няправільнае захаванне ўзораў або занадта доўгае захоўванне прыводзіць да дэградацыі геномнай ДНК.

Рэкамендацыя: мазкі з паражніны рота пажадана браць свежыя, і не пажадана выкарыстоўваць кансерваваныя мазкі для аперацый па экстракцыі геномнай ДНК;Узоры плям крыві павінны гарантаваць кваліфікаваную якасць і час захоўвання не павінен быць занадта доўгім.

2. Занадта малае выкарыстанне тканіны можа прывесці да адсутнасці экстракцыі адпаведнай геномнай ДНК.

Рэкамендацыя: Выконвайцебукаl інструкцыі па адборы проб мазка ў кіраўніцтве па эксплуатацыі і працірайце столькі разоў, колькі магчыма, каб дастатковую колькасць клетак можна было прымацаваць да тампона з паражніны рота для экстракцыі геномнай ДНК;для здабывання ўзору плямы крыві плошчу выразання плямы крыві можна адпаведным чынам павялічыць.

3. Foregene Protease няправільна захоўваецца, што прыводзіць да зніжэння яе актыўнасці або інактывацыі.

Рэкамендацыя: Удакладніце ўмовы захоўванняФoregene Protease або заменіце яе новай Foregene Protease для ферментатыўнай рэакцыі.

4. Няправільнае захаванне камплекта або занадта доўгі час захоўвання, што прыводзіць да выхаду з ладу некаторых кампанентаў камплекта.

Рэкамендацыя: Купіце новыБукальны мазок ДНКізаляцыя набор для спадарожных працэдур.

5. Буфер WB не дадае абсалютны этанол.

Рэкамендацыя: пераканайцеся, што буфер WB дадае правільны аб'ём абсалютнага этанолу.

6. Элюент няправільна дададзены ў сіліконавую плёнку.

Рэкамендацыя: дадаць 65°Cпапярэдне разагрэты элюент капае ў сярэдзіну сіліконавай мембраны і пакідае пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін для павышэння эфектыўнасці элюіравання.

Low-выход геномнай ДНК ізаляваны

Наступныя магчымыя прычыны:

1. Няправільнае захаванне ўзораў або занадта доўгае захоўванне прыводзіць да дэградацыі геномнай ДНК.

Рэкамендацыя: мазкі з паражніны рота пажадана браць свежыя, а захаваныя мазкі не варта выкарыстоўваць для экстракцыі геномнай ДНК.

2. Калі колькасць узору тканіны занадта малая, утрыманне вынятай геномнай ДНК будзе менш.

Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі па ўзяцці мазка з ротавай паражніны ў кіраўніцтве па эксплуатацыі, праціраючы столькі разоў, колькі магчыма, каб дастатковую колькасць клетак можна было прымацаваць да мазка з ротавай паражніны для экстракцыі геномнай ДНК.

3. Foregene Protease няправільна захоўваецца, што прыводзіць да зніжэння яе актыўнасці або інактывацыі.

Рэкамендацыя: Удакладніце ўмовы захоўванняthe Foregene Protease або замяніць яго на новы Foregene Protease для ферментатыўнай рэакцыі.

4. Праблемы элюента.

Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце буфер EB для элюіравання;пры выкарыстанні ddH₂O або іншыя элюенты, пацвердзіце, што pH элюата знаходзіцца ў межах 7,0-8,5.

5. Элюат няправільна дададзены па кроплях.

Рэкамендацыя: дадайце кроплі элюента ў сярэдзіну сіліконавай мембраны і пакіньце пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін для павышэння эфектыўнасці элюіравання.

6. Элюирующая вадкасць назапашваецца занадта мала.

Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце элюент для элюцыі геномнай ДНК як мінімум у адпаведнасці з патрабаваннямі інструкцыйне менш чым 15μl.

Lоў чысціні of геномная ДНКізаляваны

Нізкая чысціня геномнай ДНК можа прывесці да няўдачы або нездавальняючых вынікаў далейшых эксперыментаў, такіх як: ферменты не могуць быць раскрытыя, ПЦР не можа атрымаць цікавы фрагмент гена і г.д.

Магчымыя прычыны:

1. Забруджванне гетэрапратэінамі, забруджванне РНК.

Аналіз: ачышчальную калонку не прамывалі буферам PW;калона ачысткі прамывання буферам PW не была прамыта з выкарыстаннем правільнай цэнтрабежнай хуткасці.

Рэкамендацыя: перад даданнем этанолу пераканайцеся, што ў супернатанте няма ападкаў;абавязкова прамыйце ачышчальную калонку ў адпаведнасці з інструкцыяй, і гэты этап нельга прапускаць.

2. Забруджванне іёнамі прымешак.

Аналіз: Калонка для ачысткі прамывання буферам WB была прапушчана або прамыта толькі адзін раз, што прывяло да рэшткавага іённага забруджвання.

Рэкамендацыя: не забудзьцеся прамыць Buffer WB 2 разы ў адпаведнасці з указаннямі, каб як мага больш выдаліць рэшткавыя іёны.

3. Заражэнне ферментам РНК.

Аналіз: чужародныя РНКазы былі дададзены ў буфер;Аперацыя прамывання буфера PW была няправільнай, што прывяло да з'яўлення рэшткаў РНКазы, што паўплывала на эксперыментальныя аперацыі РНК ніжэй па плыні, такія як транскрыпцыя in vitro.

Рэкамендацыя: нуклеінавая кіслата серыі Foregeneізалянаборы могуць выдаляць РНК без дадатковага дадання РНКазы,такім чынам Камплект для вылучэння ДНК з буккального мазка/карты FTAтрэба't дадаць РНКазу;не забудзьцеся прытрымлівацца інструкцый для ачышчальнай калонкі для прамывання буфера PW, і гэты крок нельга прапусціць.

4. Астатак этанолу.

Аналіз: Buffer WB не праводзіў цэнтрыфугаванне пустой прабіркі пасля прамывання ачышчальнай калонкі.

Рэкамендацыя: выканайце правільную аперацыю цэнтрыфугавання пустой прабіркі ў адпаведнасці з інструкцыямі.

5. Іншыя забруджвання прымешкамі.

Аналіз: захаваныя або спецыяльныя ўзоры не апрацоўваюцца.

Рэкамендацыя: Старанна папярэдне апрацуйце ўзор у адпаведнасці з інструкцыямі.