FAQ дляНабор для вылучэння агульнай РНК жывёл

Наступны аналіз праблем, з якімі вы можаце сутыкнуццаэкстракцыя РНК тканін / клетак жывёл will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНК не экстрагируется або выхад РНК нізкі

Часта існуюць розныя фактары, якія ўплываюць на эфектыўнасць аднаўлення, такія як: змест РНК у ўзоры тканіны, метад аперацыі, аб'ём элюцыі і г.д.

1. Падчас працы праводзілі ледзяную ванну або крыягеннае (4 °C) цэнтрыфугаванне.

Рэкамендацыя: Працуйце пры пакаёвай тэмпературы (15-25 °C) на працягу ўсяго працэсу, не выкарыстоўвайце ванну з лёдам і не цэнтрыфугуйце пры нізкіх тэмпературах.

2. Няправільнае захаванне ўзору або празмерны час захоўвання ўзору.

Рэкамендацыя: Захоўвайце ўзоры пры тэмпературы -80 °C або замарожвайце ў вадкім азоце і пазбягайце паўторнага замарожвання-адтавання;паспрабуйце выкарыстоўваць свежую тканіну або культывуюцца клеткі для экстракцыі РНК.

3. Недастатковы лізіс пробы.

Рэкамендацыя: пры гамагенізацыі тканіны пераканайцеся, што тканіна дастаткова гамагенізавана і што клеткі тканіны дастаткова расшчаплены, каб растлумачыць вызваленне РНК.

4. Элюент дададзены няправільна.

Рэкамендацыя: пераканайцеся, што ddH без РНКазы₂O дадаюць па кроплях у сярэдзіну мембраны ачышчальнай калонкі.

5. Правільны аб'ём абсалютнага этанолу не быў дададзены ў буфер RL2 або буфер RW2.

Рэкамендацыя: выконвайце інструкцыі, дадайце патрэбны аб'ём абсалютнага этанолу ў буфер RL2 і буфер RW2 і добра змяшайце перад выкарыстаннем набору.

6. Дазоўка ўзору тканіны не падыходзіць.

Рэкамендацыя: выкарыстоўвайце 10-20 мг тканіны або (1-5) × 10⁶клетак на 500 мкл буфера RL1, так як празмернае выкарыстанне тканін можа прывесці да зніжэння экстракцыі РНК.

7. Няправільны аб'ём элюцыі або няпоўная элюцыя.

Рэкамендацыя: аб'ём элюента ачышчальнай калонкі складае 50-200 мкл;калі эфект элюіравання не з'яўляецца здавальняючым, рэкамендуецца падоўжыць час размяшчэння пры пакаёвай тэмпературы пасля дадання папярэдне нагрэтага ddH без РНКазы₂О, напрыклад, на працягу 5-10 хвілін.

8. У ачышчальнай калоне ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2.

Рэкамендацыя: калі ёсць рэшткі этанолу пасля прамывання буферам RW2, цэнтрыфугаванне пустой прабіркі на працягу 1 хвіліны, час для аперацыі цэнтрыфугавання пустой прабіркі можна павялічыць да 2 хвілін, або ачышчальную калонку можна паставіць пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін, каб адэкватна выдаліць рэшткі этанолу.

Вычышчаная РНК дэградуе

Якасць ачышчанай РНК залежыць ад такіх фактараў, як захаванне ўзору, заражэнне РНКазой, маніпуляцыі і г.д.

1. Узоры тканін не захоўваюцца своечасова.

Рэкамендацыя: калі ўзоры тканіны або клеткі не былі выкарыстаны своечасова пасля збору, іх варта неадкладна правесці ў крыякансервацыі пры -80 °C або ў вадкім азоце.Каб атрымаць РНК, выкарыстоўвайце толькі што ўзяты ўзор тканіны або клеткі, калі гэта магчыма.

2. Паўторнае замарожванне-адтаванне узораў тканін.

Рэкамендацыя: пры захоўванні ўзораў тканіны лепш разрэзаць іх на невялікія кавалачкі для захавання і выдаліць адзін з кавалкаў пры іх выкарыстанні, каб пазбегнуць паўторнага замарожвання-размарожвання ўзору і дэградацыі РНК.

3. РНКазу ўводзяць або не надзяваюць падчас аперацыі аднаразовыя пальчаткі, маскі і інш.

Рэкамендацыя: Эксперыменты па экстракцыі РНК лепш за ўсё праводзіць у асобных памяшканнях для маніпуляцый з РНК, а стол перад эксперыментам прыбіраць.

Апранайце аднаразовыя пальчаткі і маскі падчас эксперыменту, каб звесці да мінімуму дэградацыю РНК, выкліканую ўвядзеннем РНКазы.

4. Рэагенты забруджваюцца РНКазой падчас выкарыстання.

Рэкамендацыя: заменіце на новы набор для вылучэння агульнай РНК жывёл для адпаведных эксперыментаў.

5. Цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры апрацоўцы РНК, забруджаныя РНКазой.

Рэкамендацыя: пераканайцеся, што цэнтрыфужныя прабіркі, наканечнікі, піпеткі і г.д., якія выкарыстоўваюцца пры экстракцыі РНК, не ўтрымліваюць РНКазы.

Вычышчаная атрыманая РНК уплывае на далейшыя эксперыменты

РНК, ачышчаная ачышчальнай калонкай, калі іёны солі, утрыманне бялку занадта вялікае, паўплывае на наступны эксперымент, напрыклад: зваротная транскрыпцыя, Northern Blot і інш.

1. Элюіраваная РНК мае рэшткі іёнаў солі.

Рэкамендацыя: пераканайцеся, што правільны аб'ём этанолу быў дададзены ў буфер RW2, і выканайце 2 прамывання ачышчальнай калонкі пры цэнтрабежнай хуткасці, указанай для працы;калі ёсць рэшткі іёнаў солі, пакіньце ачышчальную калонку ў буферы RW2 на 5 хвілін пры пакаёвай тэмпературы і правядзіце цэнтрыфугаванне для максімальнага выдалення забруджвання солямі.

2. Рэшткі этанолу ў элюированной РНК.

Рэкамендацыя: пераканайцеся, што пасля прамывання буферам RW2 выканайце аперацыю цэнтрыфугавання пустой прабіркі на хуткасці цэнтрыфугавання, указанай для працы, павялічце час цэнтрыфугавання пустой прабіркі да 2 хвілін, калі ўсё яшчэ ёсць рэшткі этанолу, або пакіньце яе пры пакаёвай тэмпературы на 5 хвілін пасля цэнтрыфугавання пустой прабіркі, каб максымізаваць выдаленне рэшткаў этанолу.

Вылучэнне тыпаў узораў нулцэінавай кіслаты

Наборы Foregene для выдзялення РНК могуць атрымаць поўную ізаляцыю/экстракцыю РНК з наступных крыніц узораў: тканіны жывёл, раслін, клетак, вірусаў, крыві і г.д.

Як захоўваць камплект

Захоўванне пры пакаёвай тэмпературы на працягу 24 месяцаў.