Набор ForeDirect RT-qPCR
Апісанне
Набор ForeDirect RT-qPCR прызначаны для прамой ампліфікацыі РНК у рэальным часе з узятых мазкоў без працэсаў ачысткі РНК.Гэты набор завяршае цыклы qRT-PCR на працягу адной гадзіны.Сумесь ферментаў - гэта аптымізаваная сумесь зваротнай транскрыптазы, ДНК-палімеразы Hot-Start Taq, інгібітару РНКазы.Буфер рэакцыі змяшчае ўсе неабходныя кампаненты, у тым ліку аптымізаваныя кампаненты буфера Mg2+, dUTP і dNTP.
Тэхнічныя характарыстыкі
100 т
Складнікі камплекта
Агент вызвалення нуклеінавых кіслот |
Пратэктар РНК |
2× буфер RT-qPCR |
Ферментная сумесь (Taq&M-MLV) |
Інструкцыя |
Прымяненне ПЦР
1. Пасля кароткага цэнтрыфугавання прабірак для рэакцыі ПЦР змесціце іх у рэзервуар для ўзору прыбора для ампліфікацыі.
2. Цеплавой пратакол
Крок | тэмпература | Час | Цыклы | |
1 | Зваротная транскрыпцыя | 50 ℃ | 15 хвілін | 1 |
2 | Папярэдняя дэнатурацыя | 95 ℃ | 1 хв | 1 |
3 | Дэнатурацыя | 95 ℃ | 10 секунд | 42 |
4 | Адпал / Пашырэнне | 60 ℃ | 30 секунд |
нататка:Флуарэсцэнтны сігнал быў выяўлены адразу пасля кроку падаўжэння кожнага цыклу.
3. Пасля ўстаноўкі захавайце файл і запусціце рэакцыйную праграму.
Этапы працы
Перад падрыхтоўкай рэагентаў усе рэагенты ў наборы трэба размарозіць пры пакаёвай тэмпературы і акуратна змяшаць.
Падрыхтоўка рэагентаў
1. Прыгатуйце сумесь для вызвалення нуклеінавых кіслот
Кампанент | Аб'ём на ўзор або кантроль |
Агент вызвалення нуклеінавых кіслот | 5 мкл |
Пратэктар РНК | 0,5 мкл |
2. Прыгатуйце рэакцыйную сумесь
Кампанент | Аб'ём на ўзор або кантроль |
2× буфер RT-qPCR | 15 мкл |
Ферментная сумесь (Taq&M-MLV) | 1,5 мкл |
Праймеры і зонды | 1 мкл |
Захоўванне і тэрмін прыдатнасці
-Камплект захоўваць пры -20± 5℃.Тэрмін дзеяння - 12 месяцаў.
-Пазбягайце паўторных цыклаў замарожвання-адтавання (<5 цыклаў).